中黑盲蝽三種新病毒的基因組結(jié)構(gòu)與田間感染情況研究.pdf_第1頁(yè)
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1、中黑盲蝽(Adelphocoris suturalis Jakovlev)隸屬于半翅目盲蝽科,是中國(guó)南方一種重要的農(nóng)業(yè)害蟲,其寄主范圍廣泛,食性雜。目前,中黑盲蝽在生理、生態(tài)方面得到廣泛的研究。然而,未見有報(bào)道伴生微生物(如:病毒)的相關(guān)研究。本文利用Illumina HiSeqTM2000高通量測(cè)序技術(shù),對(duì)中黑盲蝽成蟲3個(gè)樣本進(jìn)行轉(zhuǎn)錄分析,通過RNA-Seq得到約23.28 Gb質(zhì)量修剪后的數(shù)據(jù)(clean data),產(chǎn)生約1347

2、22個(gè)重疊群(contigs)其中包括107486條unigenes,序列平均長(zhǎng)度797.79 bp,N50為1568 bp。利用功能注釋得到了幾個(gè)病毒基因,主要研究結(jié)果如下:
  1通過RNA-seq在中黑盲蝽體內(nèi)確定了一種新的病毒,將其命名為Adelphocorissuturalis-associated virus1(簡(jiǎn)稱ASV1)。ASV1有一個(gè)長(zhǎng)度為10845個(gè)核苷酸的單鏈RNA基因組,且包含5個(gè)開放閱讀框(ORFs)。

3、ORF1編碼一個(gè)由2592個(gè)氨基酸構(gòu)成的多肽并包含4個(gè)功能保守域:一個(gè)病毒RNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MTase)結(jié)構(gòu)域,一個(gè)FtsJ-like甲基轉(zhuǎn)移酶(FtsJ)結(jié)構(gòu)域,一個(gè)病毒RNA解旋酶(Hel)結(jié)構(gòu)域,一個(gè)RNA-dependent RNA聚合酶(RdRP)結(jié)構(gòu)域。ORF2,ORF3,ORF4和ORF5的多肽鏈分別由190,461,103和159個(gè)氨基酸構(gòu)成,其中只有ORF5包含一個(gè)結(jié)構(gòu)域:煙草花葉病毒超家族(CP)。前期NCBI Bl

4、astx結(jié)果表明ASV1與Paprika mildmottle virus(一種植物病毒)表現(xiàn)出較高的同源性,但在寄主植物上卻沒有發(fā)現(xiàn)ASV1,同時(shí)傳毒實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也表明其很可能不是一種植物病毒。后期再次聚類分析發(fā)現(xiàn)ASV1與新發(fā)現(xiàn)的果蠅屬(Drosophila)Boutonnet virus同源性較高,且在采用最大似然法(maximum-likelihood)的進(jìn)化樹中相似的基因組結(jié)構(gòu)和高引導(dǎo)值(highbootstrap value)

5、表明ASV1(可能伴隨著Boutonnet virus)可以被考慮為是一種新的昆蟲病毒分類的原型。另外,野外中黑盲蝽ASV1的感染率處于較低水平(6.60%,在212個(gè)樣本中只有14個(gè)陽(yáng)性樣本)。
  2 Adelphocoris suturalis-associated virus2(簡(jiǎn)稱ASV2)是在中黑盲蝽體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的第二種新的病毒,其長(zhǎng)度為9417 bp有4個(gè)ORF,分別由2697、106、169和61個(gè)aa構(gòu)成,其中只有O

6、RF1包含3個(gè)保守功能區(qū)域:一個(gè)MTase,一個(gè)RNA螺旋酶病毒(Hel),一個(gè)RdRP。聚類分析結(jié)果表明ASV2同ASV1一樣與果蠅屬Boutonnetvirus展現(xiàn)出較高的同源性,且構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹的結(jié)果表明ASV2同ASV1一樣可以被考慮為是一種新的昆蟲病毒分類的原型。另外,野外中黑盲蝽ASV2的感染率處于較低水平(1.42%,在212個(gè)樣本中只有3個(gè)陽(yáng)性樣本)。
  3在中黑盲蝽體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的第三種病毒為Adelphocoris

7、 suturalis-associated virus3(簡(jiǎn)稱ASV3)。ASV3的長(zhǎng)度為9922 bp包含6個(gè)ORF,每個(gè)ORF分別有322、233、719、1662、68和123個(gè)氨基酸,且功能保守域的總數(shù)為5個(gè)。其中ORF2有一個(gè)似小核糖核酸病毒衣殼蛋白功能域(Rhv),ORF3有一個(gè)Rhv和一個(gè)crpv衣殼蛋白類(CRPV),ORF4有一個(gè)Hel和一個(gè)RdRP。聚類分析結(jié)果表明ASV3與Sanxia waterstrider v

8、irus7(Iflaviridae: iflavirus)展現(xiàn)出較高的同源性,且構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹的結(jié)果說明ASV3是一種昆蟲病毒。同樣,ASV3的感染率也較低(6.60%,在212個(gè)樣本中只有14個(gè)陽(yáng)性樣本)。
  4綜上所述,本文利用RNA-seq在中黑盲蝽體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了三個(gè)新病毒的完整基因組,ASV1和ASV2的聚類分析結(jié)果和發(fā)育樹圖均表明這兩種病毒的分類地位到目前為止仍處于待定的狀態(tài),而ASV3則被確定為是Iflaviridae:

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