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文檔簡介
1、背景和目的:肝星狀細(xì)胞(HSC)在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展過程中起主導(dǎo)作用。TGF-β1/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在肝纖維化形成中具有重要作用。Smad7是TGF-β1/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的主要抑制性調(diào)控蛋白,可拮抗TGF-β1的致肝纖維化作用。本實(shí)驗(yàn)研究了Smad7對肝星狀細(xì)胞(HSC)α1(I)、α1(III)前膠原基因轉(zhuǎn)錄的作用和Smad7對HSC凋亡及調(diào)節(jié)膠原降解有關(guān)酶類的作用。 方法:應(yīng)用Fugene6介導(dǎo)Smad7質(zhì)粒
2、轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的HSC-T6,繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí),同時(shí)使用 Realtime-PCR 、RT-PCR方法鑒定轉(zhuǎn)染結(jié)果和檢測Smad7質(zhì)粒組、正常對照組、空載質(zhì)粒對照組α1(I)、α1(III)前膠原和TIMP-1 、MMP-13 mRNAmRNA水平; Westeron blot 檢測三組TIMP-1 、MMP-13蛋白水平; Hoechest33258熒光染色及流式細(xì)胞儀檢測Smad7質(zhì)粒組和空載質(zhì)粒對照組HSC凋亡。 結(jié)果:與
3、正常對照組和空載質(zhì)粒對照組相比,Smad7質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞48h后,Smad7mRNA水平顯著增高(P<0.01),α1(I)前膠原mRNA表達(dá)明顯下降(P<0.01),但α1 (III)前膠原基因表達(dá)無明顯改變(P>0.05)。三組TIMP-1 、MMP-13 mRNA及蛋白水平均無明顯改變(P>0.05)。HSC凋亡率在Smad7質(zhì)粒組和空載質(zhì)粒對照組間無顯著差異(P >0.05 )。 結(jié)論:(1)Smad7質(zhì)粒在
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