1、目的:
　　 觀察苦參素(matrine,MAT)對(duì)Wistar大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的臨床表現(xiàn)、脊髓組織病理學(xué)改變及發(fā)病過(guò)程中一氧化氮(nitric oxide,NO)／誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(induciblenitric oxide synthase,iNOS)系統(tǒng)的表達(dá),白介素-17(interleukin-17,IL-17)

2、／白介素-23(interleukin-23,IL-23)炎性軸的影響,初步探討其對(duì)EAE的防治作用及可能的機(jī)制,為開(kāi)發(fā)多發(fā)性硬化癥(multiple sclerosis,MS)新的治療途徑和方法提供有意義的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1、模型建立:應(yīng)用豚鼠全脊髓勻漿(guinea pig spinal cord homogenate,GPSCH)+完全弗氏佐劑(complete freund adjuvant,

3、CFA)制成的抗原乳劑,免疫Wistar大鼠建立EAE模型。免疫后每天觀察大鼠的活動(dòng)情況,測(cè)量體重、記錄神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分。
　　 2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥:將40只清潔級(jí)雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為4組——正常對(duì)照組(N)、EAE模型組(M)、MAT高劑量組(MAT-H)、MAT低劑量組(MAT-L)。正常對(duì)照組和模型組自免疫當(dāng)日每天一次腹腔注射6.7mL·kg-1生理鹽水注射液(normal saline,NS),連續(xù)注射16天；

4、MAT高劑量組自免疫當(dāng)日每天一次腹腔注射6.7mL·kg-1(200mg·kg-1)苦參素注射液,連續(xù)給藥16天；MAT低劑量組自免疫當(dāng)日每天一次腹腔注射6.7mL·kg-1(150mg·kg-1)苦參素注射液,連續(xù)給藥16天。
　　 3、樣本采集:實(shí)驗(yàn)大鼠在免疫后第17天眼眶后靜脈叢采血法取血,分離血清備用；并于心臟灌流后取脊髓腰膨大置于4％多聚甲醛中固定,石蠟包埋、切片。
　　 4、指標(biāo)檢測(cè):蘇木素-伊紅(HE)和變

5、色酸-2R-亮綠(C-2R-BG)染色觀察脊髓組織病理學(xué)改變,硝酸酶還原法測(cè)定EAE大鼠血清中No的表達(dá),免疫組織化學(xué)法和RT-PCR法分別檢測(cè)脊髓中iNOS及其mRNA的表達(dá),雙抗夾心ELISA法檢測(cè)血清中IL-17、IL-23的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1、大鼠發(fā)病率、體重和臨床評(píng)分變化:正常組無(wú)動(dòng)物發(fā)??；MAT-H組、MAT-L組動(dòng)物發(fā)病率低于模型組(P<0.05)；MAT-H組動(dòng)物發(fā)病率低于MAT-L組發(fā)病率(

6、P>0.05)。正常組動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)期間體重持續(xù)上升,MAT-H組、MAT-L組、模型組大鼠平均體重變化呈下降趨勢(shì)；與模型組相比較,MAT-H組、MAT-L組的體重變化較小(P<0.05)；MAT-H組與MAT-L組間體重變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與MAT-H組、MAT-L組動(dòng)物比較,模型組的平均神經(jīng)功能評(píng)分顯著升高(P<0.05)；MAT-H組與MAT-L組間神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 2、

7、組織病理學(xué)觀察:正常組動(dòng)物脊髓內(nèi)無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)與髓鞘脫失,模型組、MAT-H組、MAT-L組動(dòng)物脊髓內(nèi)均存在炎性細(xì)胞浸潤(rùn)與髓鞘脫失；與模型組相比,MAT-H組、MAT-L組大鼠脊髓炎性細(xì)胞浸潤(rùn)與髓鞘脫失有所減輕(P<0.01)；MAT-H組炎癥浸潤(rùn)細(xì)胞與髓鞘脫失比MAT-L組少(P>0.05)。
　　 3、血清中NO含量的變化:與正常組比較,模型組、MAT-H組、MAT-L組大鼠血清NO表達(dá)水平升高(P<0.05)；與模型組相比

8、,MAT-H組、MAT-L組大鼠血清NO表達(dá)水平降低(P<0.01)；但MAT-H組與MAT-L組大鼠血清NO表達(dá)水平無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　 4、脊髓中iNOS及其mRNA的表達(dá):與正常組比較,模型組、MAT-H組、MAT-L組大鼠脊髓iNOS及其mRNA表達(dá)水平升高(P<0.05):與模型組相比,MAT-H組大鼠脊髓iNOS表達(dá)水平降低(P<0.01),脊髓中iNOsmRNA在MAT-H組、MAT-L組表達(dá)水平也降

9、低(P<0.05)；但MAT-H組與MAT-L組大鼠脊髓中iNOSmRNA表達(dá)水平無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　 5、血清中IL-17、IL-23的表達(dá):與正常組比較,模型組、MAT-H組、MAT-L組大鼠血清IL-17、IL-23表達(dá)水平升高(P<0.01)；與模型組相比,MAT-H組大鼠血清IL-17、IL-23表達(dá)水平降低(P<0.01),MAT-L組表達(dá)水平也降低(P<0.05)；但MAT-H組與MAT-L組大鼠血清