1、第一部分海馬及皮層神經(jīng)元體外原代培養(yǎng)及缺糖氧再灌注損傷易感性的比較目的：建立海馬及皮層神經(jīng)元原代培養(yǎng)、缺糖氧再灌注損傷模型，在此基礎(chǔ)上分析海馬、皮層神經(jīng)元對(duì)缺糖氧再灌注損傷的易感性。方法：采用體外無(wú)血清培養(yǎng)法培養(yǎng)海馬、皮層神經(jīng)元，取8-10d的海馬、皮層神經(jīng)元，采用剝奪培養(yǎng)液氧糖法建立體外缺糖氧再灌注損傷模型，于缺糖氧再灌注3h、6h及24h時(shí)，比較觀察兩種神經(jīng)元一氧化氮(NO)的釋放量、谷胱甘肽(GSH)的含量及一氧化氮合酶(NOS)

2、、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPx)的活性變化；于缺糖氧再灌注24h時(shí)，檢測(cè)兩種神經(jīng)元乳酸脫氫酶(LDH)的釋放量，并采用臺(tái)盼藍(lán)染色、HocheSt33258神經(jīng)元核染色觀察兩種神經(jīng)元死亡、凋亡的改變。結(jié)果：缺糖氧再灌注后，海馬神經(jīng)元NOS的活性、NO的含量明顯高于皮層神經(jīng)元，而GPx的活性、GSH的含量低于皮層神經(jīng)元(P<0.05)：缺糖氧再灌注后，海馬神經(jīng)元的死亡、凋亡率亦明顯高于皮層神經(jīng)元(P<0.05)。結(jié)論：海馬神經(jīng)元相較于皮層神經(jīng)

3、元更易受缺糖氧再灌注的損傷，其可能與缺糖氧再灌注后海馬神經(jīng)元氧應(yīng)激產(chǎn)物過(guò)多如NOS活性及N0釋放量等的增高、抗氧化系統(tǒng)防御下降如GPx活性、GSH含量的下降有關(guān)。 第二部分胞二磷膽堿對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元缺糖氧再灌注損傷的保護(hù)作用目的觀察胞二磷膽堿對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元缺糖氧再灌注損傷的保護(hù)作用。方法建立海馬神經(jīng)元缺糖氧再灌注損傷模型，隨機(jī)分組為正常對(duì)照組、缺糖氧再灌注組、胞二磷膽堿干預(yù)組(1、10、100umol/L)，觀察再灌注6、24

4、h還原型谷胱甘肽含量以及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性的改變；于再灌注24h檢測(cè)海馬神經(jīng)元四甲基偶氮唑鹽(MTT)代謝率，以及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡。結(jié)果與缺糖氧再灌注組相比，胞二磷膽堿于再灌注6h可明顯提高GSH的含量及GPx的活性(P<0.05)；于再灌注24h可增高M(jìn)TT代謝率，提高GPx的活性及減少海馬神經(jīng)元凋亡(P<0.05).結(jié)論胞二磷膽堿對(duì)海馬神經(jīng)元缺糖氧再灌損傷有明顯的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與改善神經(jīng)元GSH舍量、GPX活性及減少凋亡