1、根管治療術(shù)(rootcanaltherapy,RCT)是目前牙髓病和根尖周病最有效和最完善的治療方法。作為根管治療的重要環(huán)節(jié),根管沖洗可去除和控制感染根管內(nèi)細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物。五倍子具有抗菌、收斂等功效;黃芩主要有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等作用。本課題擬研制上述兩種中藥的水提取物復(fù)合制劑作為一種新型的根管沖洗劑,并通過體外實(shí)驗(yàn),檢測(cè)其拮抗LPS(內(nèi)毒素脂多糖)對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的毒性作用,從而為新型中藥根管沖洗劑的研制提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)

2、。
　　 目的:
　　 研究不同濃度五黃提取物抑制LPS對(duì)牙周膜成纖維細(xì)胞的毒性作用,為該新型中藥根管沖洗劑的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　 方法:
　　 本實(shí)驗(yàn)采用的細(xì)胞是用組織塊原代培養(yǎng)而獲得的人牙周膜成纖維細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分為:
　　 實(shí)驗(yàn)一:通過MTT法檢測(cè)不同濃度五黃提取物拮抗LPS對(duì)牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖的影響。取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第5代人牙周膜成纖維細(xì)胞接種于96孔板,并隨機(jī)分為三組,即空白對(duì)照組、

3、藥物組、LPS組。空白對(duì)照組加入DMEM培養(yǎng)液;藥物組分別加入各濃度的五黃提取物和LPS,即12.5μg/ml+100μg/mlLPS、25μg/ml+100μg/mlLPS、50μg/ml+100μg/mlLPS;LPS組加入100μg/mlLPS+DMEM培養(yǎng)液。24、48、72小時(shí)后,采用MTT法測(cè)定各組別每孔吸光度值。
　　 實(shí)驗(yàn)二:五黃提取物對(duì)LPS刺激牙周膜成纖維細(xì)胞分泌的炎癥因子TNF-α的影響。取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第

4、5代人牙周膜成纖維細(xì)胞接種于24孔板,并隨機(jī)分為空白對(duì)照組、藥物組、LPS組?？瞻讓?duì)照組加入DMEM培養(yǎng)液;藥物組分別加入各濃度的五黃提取物和LPS,即12.5μg/ml+100μg/mlLPS、25μg/ml+100μg/mlLPS和50μg/ml+100μg/mlLPS;LPS組加入100μg/mlLPS+DMEM培養(yǎng)液。于第12、24和48小時(shí)吸取上清液,4℃離心、分裝,并放入-20℃低溫冰箱凍存待檢。采用ELISA試劑盒檢測(cè)上清

5、液中TNF-α的水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.100μg/mlLPS在24h、48h、72h與空白組相比能夠明顯抑制牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖活性(p＜0.05);在LPS存在的條件下,加入不同濃度的五黃提取物于牙周膜成纖維細(xì)胞中,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),與LPS組相比較,不同濃度的五黃提取物在24h、48h均能使牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖活力明顯提高,在72h時(shí)僅25μg/m能使牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖活力明顯提高,其中25μg/ml

6、在24h時(shí)的效果最明顯。
　　 2.與空白組相比,LPS能明顯升高牙周膜成纖維細(xì)胞分泌TNF-α的水平(p＜0.05)。在LPS存在的條件下,12.5μg/ml、25μg/ml以及50μg/ml的五黃提取物組均能使人牙周膜成纖維細(xì)胞促炎因子TNF-α的分泌明顯降低(p＜0.05),其中25μg/ml的五黃提取物在24h時(shí)的作用效果最明顯。
　　 結(jié)論:
　　 五黃提取物能有效拮抗內(nèi)毒素對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞毒性作用