1、背景：腦出血是一種常見病、多發(fā)病,其病死率和致殘率均很高,嚴(yán)重影響著中老年人的身體健康和生存質(zhì)量。近年來國(guó)內(nèi)、外對(duì)腦出血后的損傷機(jī)制研究較多,有關(guān)凝血酶的研究一直是個(gè)熱點(diǎn)問題。阿加曲班是一種人工合成的新型直接凝血酶抑制劑,只作用于凝血酶的活性位點(diǎn),與凝血酶的結(jié)合速度較快,臨床證明療效較好,優(yōu)于目前其它幾種臨床使用的凝血酶抑制劑。
　　一氧化氮(NO)在人體內(nèi)主要是由一氧化氮合酶(NOS)催化L-精氨酸生成,NO在人體內(nèi)的作用依賴于

2、NO的濃度,生理濃度的NO對(duì)機(jī)體起著正常人體所需要的多種生物學(xué)作用,而病理狀態(tài)下的高濃度NO則對(duì)人體有著多種危害。NOS分為固有型NOS(cNOS)和誘導(dǎo)型NOS(iNOS)。在正常情況下,腦組織中并不能檢測(cè)到iNOS的表達(dá),但在包括腦出血等病理?xiàng)l件下,腦組織則可以誘導(dǎo)iNOS的表達(dá),進(jìn)而產(chǎn)生大量的NO,對(duì)人體產(chǎn)生危害。在對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠的研究中發(fā)現(xiàn),用敲除了iNOS基因的大鼠或者選用iNOS抑制劑,均可減輕缺血性的腦損傷,提示我們iNOS

3、在大鼠腦出血中可能發(fā)揮著重要的作用。
　　目的：探討阿加曲班干預(yù)腦出血后是否減輕腦水腫的形成及程度、改善血腦屏障的破壞程度,是否有助于大鼠神經(jīng)功能的恢復(fù)及是否對(duì)大鼠腦出血灶周組織iNOS的表達(dá)有影響,初步探討iNOS在腦出血后對(duì)凝血酶作用機(jī)制的影響及阿加曲班的干預(yù)效果,為臨床阿加曲班的應(yīng)用和凝血酶作用機(jī)制的研究提供基礎(chǔ)資料。
　　方法：
　　1.選用由鄭州大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的健康雄性SD大鼠,隨機(jī)分為對(duì)照組(假手術(shù)組

4、)、腦出血組和阿加曲班干預(yù)組。
　　2.模型建立:將大鼠用腹腔麻醉后,固定在腦立體定位儀上,腦出血組和阿加曲班干預(yù)組向大鼠腦內(nèi)右側(cè)尾狀核注射60μl自體血,對(duì)照組只進(jìn)針而不注射自體血。大鼠模型制作成功后3h,阿加曲班干預(yù)組由尾靜脈注射阿加曲班(1mg/kg),腦出血組和對(duì)照組注射生理鹽水(1mg/kg),每間隔24h注射一次。
　　3.以模型建立成功后6h、12h、1d、3d、5d、7d六個(gè)時(shí)間點(diǎn),麻醉后快速處死大鼠。以β-

5、actin為內(nèi)參,檢測(cè)各組大鼠腦出血灶周組織中iNOS基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平,用Western blotting檢驗(yàn)?zāi)X出血灶周組織iNOS的蛋白表達(dá)水平;并用伊文思藍(lán)(Evans Blue, EB)檢測(cè)血腦屏障通透性,干-濕重法檢測(cè)腦組織水含量;各組大鼠處死前均進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)定。
　　4.用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,多組間比較用單因素方差分析,組間兩兩比較用SNK法,檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05

6、。x±s。
　　結(jié)果：
　　1.阿加曲班干預(yù)組的各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能評(píng)分均高于腦出血組的評(píng)分,第5d和7d時(shí)已接近對(duì)照組評(píng)分;在第12h、1d及3d時(shí),阿加曲班干預(yù)組和腦出血組的神經(jīng)功能評(píng)分的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);腦出血組和對(duì)照組在各時(shí)間點(diǎn)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.腦出血組各時(shí)間點(diǎn)的腦水含量與對(duì)照組相比顯著上升(P<0.05),腦出血組腦含水量從6h開始增加,1d和3d最高,5d開始下降

7、,7d時(shí)仍高于對(duì)照組;阿加曲班干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)腦水含量均高于對(duì)照組的比值,但低于腦出血組各時(shí)間點(diǎn)的比值,在第12h、1d、3d和5d時(shí)與腦出血組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.阿加曲班干預(yù)組和腦出血組各時(shí)間點(diǎn)的Evans Blue含量均比對(duì)照組含量升高,阿加曲班干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)均比腦出血組的Evans Blue含量低;與對(duì)照組相比,腦出血組在第12h、1d、3d、5d和7d時(shí)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),阿加曲班干

8、預(yù)組在第12h、1d和3d時(shí)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　4.阿加曲班干預(yù)組和腦出血組的iNOS mRNA轉(zhuǎn)錄水平均比對(duì)照組有所升高,和對(duì)照組相比,腦出血組6個(gè)時(shí)間點(diǎn)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),阿加曲班干預(yù)組的差異在6h、12h、1d和3d時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。阿加曲班干預(yù)組和腦出血組的iNOS蛋白表達(dá)水平均比對(duì)照組有所升高,和對(duì)照組相比,腦出血組5個(gè)時(shí)間點(diǎn)(除6h外)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.

9、05),阿加曲班干預(yù)組的差異在12h、1d、3d和5d時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.利用阿加曲班干預(yù)腦出血大鼠模型后,有效減輕了大鼠腦出血后灶周組織的腦水腫的程度,降低了大鼠血腦屏障的通透性,對(duì)血腦屏障的功能恢復(fù)有著促進(jìn)作用,也有助于腦出血大鼠模型神經(jīng)功能的較快恢復(fù);
　　2.阿加曲班可有效抑制大鼠腦出血后iNOS mRNA和蛋白水平的上調(diào)變化,提示通過下調(diào)iNOS mRNA和蛋白的表達(dá)可能是阿