1、本文克隆了水稻苯達(dá)松敏感突變體Bel基因，構(gòu)建植物表達(dá)載體，并將該基因分別導(dǎo)入擬南芥、油菜(Brassica napus)、煙草，驗(yàn)證基因功能，研究其表達(dá)情況、抗藥特性和遺傳規(guī)律，為培育出抗苯達(dá)松和磺酰脲類除草劑的油菜新品種和該基因應(yīng)用于雜交制種打下基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下： 1、提取水稻品種日本晴總RNA，通過RT-PCR，得到基因Bel的ORF片段，其長度為1542bp。將Bel基因克隆到pGEM-T Easy載體，經(jīng)測(cè)序及同源序

2、列比對(duì)，確定得到的Bel基因序列與GenBank中的AK104825序列一致。 2、以質(zhì)粒pCAMBIA3301為基礎(chǔ)，構(gòu)建了以bar基因?yàn)檫x擇標(biāo)記的植物表達(dá)載體pCAMBIA3301-BEL，其中目的基因Bel替換了原質(zhì)粒中的GUS基因片段。表達(dá)載體經(jīng)酶切鑒定正確。 3、用蘸花的方法轉(zhuǎn)化擬南芥，經(jīng)Basta篩選得到轉(zhuǎn)化植株32株，PCR檢測(cè)初步確定目的片段已整合進(jìn)擬南芥基因組中。 4、取轉(zhuǎn)基因擬南芥4株，提取R

3、NA，經(jīng)RT-PCR檢測(cè)基因的表達(dá)情況，結(jié)果表明該基因能正常表達(dá)，表型與對(duì)照無明顯差異。 5、對(duì)生長3周左右的轉(zhuǎn)基因擬南芥后代進(jìn)行抗藥性試驗(yàn)，對(duì)三種除草劑分別設(shè)立了濃度梯度，得出了轉(zhuǎn)化株對(duì)不同除草劑的有效使用范圍，其中苯達(dá)松是48％的濃度稀釋4000X-16000X，稻無草是0.1g/L-3g/L，Basta是18.5％的濃度稀釋167X.10000X，為該基因的實(shí)際應(yīng)用提供了依據(jù)。 6、用蘸花的方法轉(zhuǎn)化了油菜，通過除草