1、地鱉蟲是《中華人民共和國藥典》收錄的活血化瘀類動物中藥材。目前研究發(fā)現(xiàn)該蟲含有豐富的纖溶活性蛋白組分,在體內(nèi)外均顯示出明顯的抗血栓效果。地鱉蟲入藥能明顯提高機體的纖溶能力,改善惡性腫瘤患者體內(nèi)的高凝狀態(tài),降低血栓并發(fā)癥,進而緩解癌癥癥狀。民間有將地鱉蟲入藥治療多種惡性腫瘤的例子,但尚未見到此類研究的相關(guān)文獻報道。應用現(xiàn)代藥理學方法對地鱉蟲的抗腫瘤活性成分及其作用機理進行系列研究十分必要。本文通過生化途徑,提取純化了地鱉蟲纖溶活性蛋白組分

2、,研究了該蛋白提取物的體內(nèi)抑瘤效果,發(fā)現(xiàn)了該纖溶活性蛋白能抑制新生血管生成,為進一步研究地鱉蟲蛋白提取物的抗腫瘤機理提供了切入點。
　　本研究中,用不同濃度的地鱉蟲蛋白提取物(0.2~0.8 g/ml,生藥量)作用于S180肉瘤荷瘤小鼠,觀察各組的抑瘤效果及相關(guān)生理指標的差異;同時分別用地鱉蟲蛋白粗提物和經(jīng)鹽析、離子交層析以及分子篩層析等技術(shù)對地鱉蟲蛋白粗提物進一步純化得到的活性蛋白,作用于雞胚尿囊膜,觀察它們對新生血管生成的抑制

3、作用。研究結(jié)果顯示,地鱉蟲蛋白粗提物對 S180肉瘤荷瘤小鼠有顯著的抑瘤作用;蛋白粗提物和純化的活性蛋白對雞胚尿囊膜新生血管的生成均有明顯抑制作用,其中純化品的抑制活性顯著高于粗品,以生藥量計算顯示一定的量效關(guān)系;且二者對尿囊膜下的雞胚胎生長發(fā)育的影響較陽性對照(地塞米松組)小,差異顯著。由此顯示,地鱉蟲蛋白提取物有較好的體內(nèi)抑瘤作用及血管生成抑制活性。
　　另外,本研究通過建立實體型肝癌H22荷瘤小鼠模型,分別以地鱉蟲蛋白提取物

4、對其進行連續(xù)灌胃(ig.)、隔2日腹腔注射(ip.)等處理,發(fā)現(xiàn)實體瘤的生長被明顯抑制。分析各實驗組小鼠肝組織MDA含量、SOD活力、GPT水平、GOT水平和血清GPT水平等生化指標,結(jié)果顯示地鱉蟲蛋白處理組動物的肝組織抗氧化能力明顯增強,其生理狀態(tài)也優(yōu)于模型對照組;其次,發(fā)現(xiàn)地鱉蟲蛋白處理組動物的腫瘤組織 SOD活力明顯高于模型對照組,顯示地鱉蟲蛋白提取物在提高機體纖溶能力的同時,也改變了實體瘤組織生長的生化狀態(tài);對實驗小鼠血清抗H2

5、2腫瘤抗體水平的檢測,發(fā)現(xiàn)陽性藥物對照組抗體水平顯著降低,而地鱉蟲蛋白處理組則明顯升高,這顯示了地鱉蟲蛋白提取物對實體瘤生長的抑制機理不同于陽性對照藥環(huán)磷酰胺,環(huán)磷酰胺能直接殺傷腫瘤細胞,但對免疫系統(tǒng)的抑制則是重要的副作用之一,地鱉蟲蛋白對抗H22腫瘤抗體的水平的提高,可能是其抑瘤機理的一部分。
　　由于地鱉蟲纖溶活性蛋白顯示了良好的器官水平新生血管抑制作用,而在新生血管生成過程中血管內(nèi)皮細胞起著十分重要的作用。通過體外細胞培養(yǎng)實

6、驗,發(fā)現(xiàn)提取的地鱉蟲纖溶活性蛋白能夠抑制人微血管內(nèi)皮細胞(MVEC)的增殖;另外Annexin V-FITC/PI雙熒光染色檢測、單細胞凝膠電泳(SCGE)檢測結(jié)果顯示,地鱉蟲纖溶活性蛋白能誘導MVEC凋亡。
　　地鱉蟲作為一種傳統(tǒng)的活血化瘀類動物藥材,能明顯提高機體的纖溶狀態(tài),改善血液循環(huán)。通過本項研究進一步表明,其纖溶活性蛋白提取物對實體瘤有明顯的抑制作用,且能顯著改善荷瘤動物的生理狀態(tài)。此外,它還呈現(xiàn)出顯著的新生血管抑制活性