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1、本實(shí)驗(yàn)以傳統(tǒng)中藥材雌性地鱉蟲(chóng)(Eupolyphaga sinensis Walker)為原料,采用浸提、鹽析和DEAE-52纖維素離子層析等純化方法,從其體內(nèi)分離純化得到纖溶活性蛋白(Fibrinolyric Protein of Eupolyphaga sinensis Walker,EFP),采用SDS-PAGE電泳法對(duì)其進(jìn)行了分子量和純度測(cè)定,SDS-PAGE結(jié)果顯示其中有三種蛋白亞基,分子量為別為74.9KD,71.5KD,65
2、.2KD,采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)得其中的蛋白含量為17.2%;采用纖維蛋白平板法測(cè)定EFP纖溶活性,測(cè)得其纖溶活性為20U/mg。
通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn),構(gòu)建荷瘤小鼠模型,藥物實(shí)驗(yàn)分為陽(yáng)性對(duì)照組(環(huán)磷酰胺),陰性對(duì)照組(生理鹽水),藥物高濃度組、中濃度組和低濃度組。實(shí)體瘤通過(guò)瘤重計(jì)算抑瘤率,腹水瘤通過(guò)細(xì)胞濃度計(jì)算抑瘤率。結(jié)果顯示EFP對(duì)S180腹水瘤有較好的抑制率,藥劑量為2.90mg/kg的抑制率為69.56%,明顯高于環(huán)磷酰胺(2
3、0mg/kg)的51.75%的抑制率。EFP對(duì)S180實(shí)體瘤有較好抑制作用,藥劑濃度為1.45g/kg時(shí),抑制率為37.48%,高于環(huán)磷酰胺(20mg/kg)的35.59%的抑制率。并呈現(xiàn)一定的藥物劑量依賴性。EFP對(duì)H22腹水瘤有較好的抑制率,藥劑量為2.90mg/kg的抑制率為56.0%,和環(huán)磷酰胺(20mg/kg)的56.02%的抑制率相當(dāng)。藥劑濃度為0.73mg/kg時(shí),對(duì)H22實(shí)體瘤抑瘤率為41%,高于環(huán)磷酰胺(20mg/kg
4、)的37%的抑制率。通過(guò)VEGF含量檢測(cè)可以看到,在S180荷瘤小鼠實(shí)驗(yàn)中,生理鹽水組的荷瘤小鼠血清中VEGF含量為140.0 pg/ml,而藥物組高濃度組荷瘤小鼠的VEGF含量?jī)H為92.4 pg/ml。在H22荷瘤小鼠實(shí)驗(yàn)中,生理鹽水組的荷瘤小鼠血清中VEGF含量為91.1 pg/ml,而藥物組高濃度組荷瘤小鼠的VEGF含量?jī)H為57.8 pg/ml,從上面的實(shí)驗(yàn)可以看到小鼠給藥量和VEGF含量呈負(fù)相關(guān)。端粒酶活性的檢測(cè)也可以看到,相對(duì)
5、與生理鹽水組,藥物組的端粒酶活性都有所降低。
通過(guò)體外實(shí)驗(yàn),不同濃度的EFP含藥血清和EFP分別作用于H22,HeDG-2,MCF-7細(xì)胞株,于48h采用MTT法檢測(cè)各組血清和EFP對(duì)腫瘤細(xì)胞株增殖的抑制率。結(jié)果表明,EFP含藥血清組對(duì)H22,HepG-2,MCF-7細(xì)胞的增殖均有抑制作用,抑制作用呈一定的量效和時(shí)效關(guān)系,即隨著含藥血清濃度的增加,抑制率逐漸增加;而各組EFP對(duì)H22,HepG-2細(xì)胞的增殖則沒(méi)有抑制作用,
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