1、目的:1.建立小鼠成纖維細胞系NIH-3T3應激適應細胞模型,為應激適應研究提供平行可比的實驗對象.2.建立HSP90穩(wěn)定高表達細胞系,探討HSP90在應激適應中作用及機制.3.建立雙向電泳技術平臺,初步分析應激與適應對蛋白質(zhì)合成的影響,篩選應激適應相關蛋白.結論:1.通過對NIH-3T3細胞進行預熱處理,通過觀測細胞膜損傷、DNA損傷、細胞形態(tài)變化情況,確定應激保護的時間點,建立了細胞應激適應模型,初步確認HSP90在該模型中的保護作

2、用.2.通過轉(zhuǎn)染人類HSP90 β基因可獲得HSP90穩(wěn)定表達細胞株.HSP90高表達導致HSP90蛋白細胞內(nèi)分布改變,應激反應性增強,與部分底物蛋白的結合性改變.提示細胞可通過HSP90分子伴侶功能,抗衡應激反應中蛋白質(zhì)變性引起的細胞損傷.3.雙向電泳分析結果提示,細胞在緊急應激狀態(tài),可能會傾向于選擇性地合成能夠迅速翻譯的小分子量蛋白質(zhì),應對應激損傷.預適應可通過提高細胞內(nèi)保護性蛋白的貯備量,在再次應激時發(fā)揮保護作用.中間絲vimen