1、熱應(yīng)激是影響雞生產(chǎn)性能的重要因子之一,本研究基于前期獲得的基因芯片表達譜分析結(jié)果,針對已經(jīng)篩查到的與雞熱應(yīng)激相關(guān)的候選基因(HSP90,GPR23和ITGA8)開展進一步的功能研究。
　　1.持續(xù)熱應(yīng)激后恢復(fù)常溫過程中HSP90與GPR23在不同群體中的mRNA表達情況:分別選取8周齡健康強健的淮南麻黃雞(H)和文昌雞(W)公雞各126只,將室溫快速提升至(35±1)℃并以此時作為熱應(yīng)激起始(0h),持續(xù)高溫(35±1)℃處理72

2、h后恢復(fù)正常室溫(24±1℃)。采集兩個品種高溫處理0、12、24、72h及恢復(fù)常溫后12、24、72h各時間點18只個體的下丘腦組織。利用熒光定量PCR技術(shù),檢測HSP90,GPR23基因在H和W下丘腦組織中各時間點的表達量變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),HSP90持續(xù)高溫72h至恢復(fù)常溫72h過程中,在H和W下丘腦組織中的表達趨勢相似:均表現(xiàn)為先上升后下降趨勢,24h表達豐度最高,且HSP90在H下丘腦各時間點中的表達量均高于W。GPR23在H

3、中的表達情況為:隨著高溫持續(xù)時間的延長,0-72h的表達量持續(xù)升高,72h表達量達到最高,室溫恢復(fù)正常后12-72h,表達量逐漸降低。在W下丘腦中的表達量在高溫處理的0-24h表達量急劇上升,24h達到最高峰(P<0.05),之后表達量呈逐漸下降的趨勢。
　　2.SNPs檢測:通過DNA直接測序的方法,對候選基因(HSP90、GPR23、ITGA8)的外顯子及部分內(nèi)含子區(qū)域進行SNP位點檢測,分別在HSP90的W4-87、GPR2

4、3的A2-767G和ITGA8的A4-2798G位置各發(fā)現(xiàn)一個突變位點。通過比對發(fā)現(xiàn)HSP90W4-87位于第四外顯子,但此位點的突變并未引起氨基酸的改變。其他兩個突變位點分別位于GPR23的第2和ITGA8的第4內(nèi)含子內(nèi)。3個突變位點在H和W中均處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)。對各位點在H和W基因型差異比較分析中并未發(fā)現(xiàn)差異顯著基因型(P>0.05)。
　　結(jié)論:HSP90、GPR23在H和W下丘腦中的表達量在持續(xù)高溫