1、RA在APML治療上的效果被認為是由于誘導分化和克隆清除.對于相關的免疫學機制,Geary SM等的研究認為維甲酸誘導HL-60細胞分化后細胞免疫刺激能力增強以及表面某些粘附分子和共刺激分子的表達上調.維甲酸作為分化療法治療APML的臨床藥物,可能的作用機理除了有利于免疫刺激的細胞表面分子的表達上調,是否還與一些細胞蛋白的表達有關?蛋白質組學研究是近年生命科學領域的熱點之一.蛋白質組學的技術和方法已在細胞生長發(fā)育調節(jié)、信號轉導、疾病診斷

2、的分子標記,以及藥物開發(fā)研究等多領域被廣泛應用,并成為功能基因組研究的重要組成部分.用蛋白質組學技術分析維甲酸誘導分化的HL-60細胞蛋白變化,有利于理解維甲酸作用機理.為此我們用比較蛋白質組方法分析比較ATRA誘導HL-60細胞蛋白質組的變化并對部分差異蛋白點進行質譜測序鑒定.再根據(jù)蛋白鑒定結果,用RNA干擾技術對蛋白功能進行初步研究.我們首先確定了ATRA誘導HL-60細胞分化的條件.為了分析分化細胞的蛋白表達變化,用13cm pH

3、3-10范圍的IPG膠條做IEF,雙向電泳分析HL-60和HR96(ATRA處理96小時的HL-60細胞)細胞蛋白表達變化,分別可檢測622±66和724±51個蛋白點.在分子量約10kDa,pI4-5區(qū)域有兩個蛋白特異表達于HR96分化細胞中,而未分化的HL-60細胞不表達.為了鑒定在HR96細胞蛋白中表達的兩個蛋白點,最初試圖用Edman降解法進行N-端自動測序,但是兩個蛋白點都沒有出峰,可能這兩個蛋白的N-端氨基酸都有翻譯后修飾使

4、N-端封閉而不能Edman降解法測序,我們用nano-ESI-MS/MS進行了進一步分析.最后對S100A9在ATRA誘導HL-60細胞分化中的作用進行了初步研究.構建了表達反義RNA的pLXSA9(R)以及表達siRNA的pLNSAi-1和pLNSAi-2重組逆轉錄病毒載體.分別在包裝細胞中形成病毒顆粒,病毒上清轉染的HL-60細胞經(jīng)ATRA處理后,用RT-PCR檢測ATRA處理細胞S100A9的表達情況,pLXSA9(R)幾乎完全抑