1、目的:(1)研究頸椎前路手術術式所取髓核組織中髓核細胞生物學特性,及用于椎間盤髓核組織工程學種子細胞的可行性。(2)探討適合組織工程學種子細胞的髓核細胞的代次。(3)研究凍存復蘇處理是否影響髓核細胞Ⅱ型膠原蛋白合成及細胞增殖。
　　方法:(1)采用酶消化法提取經頸椎前路手術中取出的人頸椎間盤髓核組織中髓核細胞。(2)對髓核細胞進行體外培養(yǎng),應用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化及生長情況,應用Ⅱ型膠原蛋白免疫組化法對細胞爬片的細胞進行鑒定

2、。(3)應用Image-Pro Plus6.0軟件測量傳1至5代次髓核細胞免疫組化照片平均光密度,從而觀察胞質內Ⅱ型膠原蛋白含量的差異。(4)按細胞是否做凍存復蘇處理分為 A、B兩組,A組細胞于-80℃冰箱中凍存2周后復蘇的細胞,B組細胞為未經凍存復蘇的細胞。應用MTT法分別測量 A、B兩組 OD值,從而觀察 A、B兩組髓核細胞的增殖活力的差異。應用Image-Pro Plus6.0軟件對A、B兩組髓核細胞免疫組化照片進行平均光密度測量

3、,從而觀察在凍存對髓核細胞胞質內Ⅱ型膠原蛋白含量差異的影響。
　　結果:(1)采用酶消化法可成功分離并培養(yǎng)出人髓核細胞,傳1至2代細胞形態(tài)呈短梭型、三角形或多邊形,傳3代以后,細胞形態(tài)逐漸變?yōu)殚L梭型;(2)Ⅱ型膠原蛋白免疫組化測得平均光密度值,傳1與2代比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),傳3、4、5代與傳1代相比差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(3)A組細胞胞質內Ⅱ型膠原蛋白免疫組化測得平均光密度值較B組細胞無明顯統(tǒng)計學差