1、殘留在動(dòng)物可食性組織中的抗菌藥物被人體攝入后可能對(duì)人體腸道菌群產(chǎn)生各種不良影響，而環(huán)丙沙星等喹諾酮類藥物應(yīng)用廣泛，已經(jīng)導(dǎo)致了大量耐藥細(xì)菌的產(chǎn)生。該研究利用體外人腸道消化模型，通過(guò)振蕩培養(yǎng)人腸道菌模擬低劑量環(huán)丙沙星在人胃腸道的消化過(guò)程，同時(shí)設(shè)立無(wú)胃腸消化過(guò)程的細(xì)菌耐藥性誘導(dǎo)模型，研究環(huán)丙沙星在可食性動(dòng)物組織中發(fā)生殘留時(shí)對(duì)人腸道菌耐藥性的影響。腸道消化模型以人體腸道常住條件病原菌為指示菌，大腸桿菌和糞腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的細(xì)菌接種濃度為105、1

2、06、108CFU/mL，健康志愿者糞便中分離到的大腸桿菌、沙門氏菌敏感菌株細(xì)菌接種濃度為106CFU/mL；無(wú)胃腸消化過(guò)程的模型以大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株、糞腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株為指示菌，細(xì)菌接種濃度為106CFU/mL。各模型環(huán)丙沙星藥物濃度均設(shè)0.1μg/mL、0.5μg/mL和2μg/mL三個(gè)劑量組和無(wú)藥對(duì)照組，厭氧振蕩培養(yǎng)一天或連續(xù)七天。采用美國(guó)國(guó)家臨床試驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)推薦的二倍瓊脂稀釋法檢測(cè)誘導(dǎo)前后細(xì)菌對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星、青霉素、慶大霉

3、素、四環(huán)素、紅霉素、氨芐青霉素、頭孢氨芐、氯霉素、磺胺二甲嘧啶等十種抗菌藥物敏感性的變化；采用平板稀釋計(jì)數(shù)法觀察經(jīng)過(guò)一天誘導(dǎo)后細(xì)菌數(shù)量的變化；對(duì)誘導(dǎo)中產(chǎn)生的對(duì)環(huán)丙沙星敏感性下降的菌株，進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增GyrA基因(gyrA)的耐藥決定區(qū)，比較耐藥決定區(qū)核苷酸序列，分析耐藥的分子機(jī)制。 在胃腸消化模型和無(wú)消化模型中，經(jīng)一天誘導(dǎo)后，0.1μg/mL以上環(huán)丙沙星對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，對(duì)糞腸球菌生長(zhǎng)的

4、抑制作用不顯著。七天誘導(dǎo)后，無(wú)消化模型中0.5μg/mL以上環(huán)丙沙星使大腸桿菌或沙門氏菌死亡。胃腸消化模型中2μg/mL環(huán)丙沙星使105和106CFU/mL細(xì)菌接種量的大腸桿菌或沙門氏菌死亡。所有劑量組中存活的大腸桿菌、沙門氏菌對(duì)環(huán)丙沙星和恩諾沙星都產(chǎn)生耐藥，對(duì)其它抗菌藥無(wú)耐藥現(xiàn)象。0.1μg/mL以上環(huán)丙沙星對(duì)糞腸球菌的藥物敏感性影響仍不顯著。GyrA基因分析發(fā)現(xiàn)耐藥細(xì)菌GyrA基因耐藥決定區(qū)核苷酸有突變，并且按核苷酸順序推導(dǎo)出Gyr

5、A亞基第83或87位氨基酸也發(fā)生了改變。以上結(jié)果表明：細(xì)菌在誘導(dǎo)前對(duì)環(huán)丙沙星的敏感性低，誘發(fā)耐藥的可能性?。淮竽c桿菌、沙門氏菌對(duì)環(huán)丙沙星和恩諾沙星耐藥性的產(chǎn)生與誘導(dǎo)的藥物濃度呈正相關(guān)，與誘導(dǎo)時(shí)間呈正相關(guān)，與誘導(dǎo)開(kāi)始時(shí)細(xì)菌的接種數(shù)量呈負(fù)相關(guān)；復(fù)雜的腸道環(huán)境能降低環(huán)丙沙星的藥效；誘導(dǎo)的耐藥細(xì)菌從分子水平上存在突變。 總之，從耐藥性發(fā)生的程度、菌株和環(huán)境來(lái)看，低劑量的環(huán)丙沙星對(duì)人體腸道細(xì)菌有耐藥選擇作用，由于復(fù)雜的環(huán)境能降低環(huán)丙沙星的