1、背景:
　　多發(fā)性硬化(MS)是一種多發(fā)于年輕人的慢性炎性脫髓鞘疾病,嚴(yán)重影響人們的生命健康。目前,該疾病還沒(méi)有完整的治療措施,因此人們對(duì)該疾病的治療研究付出了巨大地努力,例如通過(guò)調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)或者抗炎治療,或者通過(guò)降低少突膠質(zhì)細(xì)胞的死亡數(shù)量來(lái)保護(hù)軸突,防止軸突損傷等。目前的研究發(fā)現(xiàn)大麻素對(duì)MS的疾病有很好的治療效果,應(yīng)用非選擇性大麻素受體激動(dòng)劑比單獨(dú)應(yīng)用選擇性CB1或CB2受體激動(dòng)劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性自免性腦脊髓炎(EAE)模型能發(fā)揮更好的

2、治療效果;大麻素WIN55,212-2為一種人工合成的大麻素,近期的研究發(fā)現(xiàn)其能夠很好的緩解EAE模型的癥狀,治療效果主要是通過(guò)其發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答和抗炎作用來(lái)實(shí)現(xiàn)的,進(jìn)而能夠促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞以及少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞的存活,增加olig-2的表達(dá)。但大麻素在非免疫調(diào)節(jié)途徑下對(duì)MS的治療效果卻是未知,因此我們通過(guò)利用受免疫調(diào)節(jié)影響較小的Cuprizone(CPZ)誘導(dǎo)的脫髓鞘模型來(lái)觀察大麻素WIN55,212-2在非免疫環(huán)境下對(duì)MS的治療效

3、果,為大麻素對(duì)脫髓鞘疾病的治療機(jī)制提供新的補(bǔ)充
　　目的:
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體重和行為學(xué)檢測(cè)對(duì)CPZ模型小鼠的整體狀態(tài)進(jìn)行分析,然后主要對(duì)該模型的髓鞘脫失進(jìn)行研究,利用LFB、MBP等形態(tài)學(xué)手段檢測(cè)CPZ模型小鼠髓鞘的變化以及注射大麻素WIN55,212-2后的治療效果,同時(shí)通過(guò)GFAP免疫組化染色觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞的變化,以探討大麻素WIN55,212-2對(duì)膠質(zhì)瘢痕的影響。
　　方法:
　　取6周齡C57BL/6雄

4、性小鼠,體重在15-16g之間,按不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆譃槟Ｐ蛯?shí)驗(yàn)研究部分和藥物注射實(shí)驗(yàn)研究部分。①模型實(shí)驗(yàn)研究部分:分為正常組、CPZ模型組,正常組3只,CPZ模型組15只,共18只。正常組每天喂養(yǎng)普通飼料,CPZ模型組每天喂養(yǎng)含有0.25％CPZ的混合飼料;CPZ模型鼠從喂養(yǎng)鼠糧開(kāi)始每隔一天進(jìn)行體重和行為學(xué)(旋轉(zhuǎn)棒,曠場(chǎng)試驗(yàn))檢測(cè),從第1周末開(kāi)始,每周3只灌注取材,連續(xù)5周,第5周末結(jié)束(CPZ1周組,CPZ2周組,CPZ3周組,CPZ4周

5、組,CPZ5周組),利用LFB染色觀察胼胝體區(qū)域髓鞘變化,利用GFAP免疫組化染色觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞。②藥物注射實(shí)驗(yàn)研究部分:分為正常組、第2周WIN55,212-2給藥組與DMSO對(duì)照組、第4周WIN55,212-2給藥組及相應(yīng)DMSO對(duì)照組,每組10只,共50只。正常組每天喂養(yǎng)普通飼料,給藥組每天喂養(yǎng)含有0.25%CPZ的混合飼料,在第2周初和第4周初進(jìn)行WIN55,212-2注射,DMSO(二甲基亞砜,WIN55,212-2溶劑)對(duì)

6、照組則在相同條件下注射10%DMSO:生理鹽水1:1的混合液,繼續(xù)喂養(yǎng)CPZ混合飼料,于第3、5周末通過(guò)體質(zhì)量變化觀察整體狀態(tài);旋轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)觀察小鼠運(yùn)動(dòng)功能,利用LFB和MBP染色觀察胼胝體區(qū)域髓鞘變化,利用GFAP免疫組化染色觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞。
　　結(jié)果:
　　1.CPZ模型小鼠與正常小鼠的比較
　　與正常組相比,隨著時(shí)間延長(zhǎng),在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí):①同期CPZ模型小鼠體重明顯下降(P<0.05);②旋轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)運(yùn)

7、動(dòng)功能逐漸減退,實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)部分小鼠幾乎不能維持在旋轉(zhuǎn)棒上(P<0.05),曠場(chǎng)試驗(yàn)中CPZ模型小鼠爬行總路程下降,但通過(guò)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中央路程比發(fā)現(xiàn)CPZ模型小鼠的探索習(xí)性并沒(méi)有受到影響(P>0.05);③LFB染色發(fā)現(xiàn)模型小鼠的髓鞘逐漸脫失,實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)髓鞘幾乎完全脫失(P<0.05);④GFAP組化染色發(fā)現(xiàn)星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量逐漸增多(P<0.05)。
　　2.大麻素WIN55,212-2對(duì)CPZ模型的治療作用
　　與同期DMSO對(duì)

8、照組比較發(fā)現(xiàn),注射大麻素WIN55,212-2組后:⑴CPZ模型小鼠體重下降趨勢(shì)明顯弱于DMSO對(duì)照組(P<0.05);⑵轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)給藥組運(yùn)動(dòng)功能弱于正常組,與DMSO對(duì)照組相比明顯改善(P<0.01);⑶LFB染色發(fā)現(xiàn)給藥組髓鞘脫失減緩(P<0.01),MBP免疫組化染色也驗(yàn)證了此結(jié)果(P<0.01);⑷注射WIN55,212-2組GFAP細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)數(shù)量明顯少于對(duì)照組。
　　結(jié)論:
　　1、WIN55,212-2能夠改

9、善CPZ脫髓鞘模型小鼠的體重和運(yùn)動(dòng)功能等整體狀態(tài)。
　　2、CPZ模型小鼠在5周末髓鞘完全脫失,能很好地模擬MS髓鞘脫失的病理變化,注射WIN55,212-2能夠減緩CPZ模型小鼠髓鞘的脫失,促進(jìn)髓鞘的修復(fù)。
　　3、CPZ模型小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量逐漸增多,這可能加速膠質(zhì)瘢痕的形成影響髓鞘的修復(fù);WIN55,212-2可能通過(guò)減少膠質(zhì)瘢痕的形成來(lái)促進(jìn)髓鞘的修復(fù)。
　　本次研究主要證明了大麻素WIN55,212-2對(duì)受免