1、研究背景：
　　隨著社會發(fā)展,冠狀動脈粥樣硬化性心臟病對人類健康的危害日益突出,雖然近年來,大量新的治療手段、新的藥物應用于臨床,冠心病防治水平有所提高,但缺血性心臟病及其所導致的心力衰竭、心律失常、心肌梗死仍然具有非常高的患病率、致死率。尋找經濟有效的治療方法一直是臨床醫(yī)學領域的熱點之一。自Murry發(fā)現缺血預適應對心肌具有保護作用以來,人們一直在探索更加簡便易行、效果確切的預處理保護手段,缺氧預適應、缺血后處理等方式都是在此領

2、域的延伸,間歇性缺氧預處理作為一種新的預處理模式,在多數研究中也被證實其具有缺血預適應樣心肌保護作用。間歇性缺氧不同于持續(xù)性缺氧,不僅能保持持續(xù)性缺氧適應對于心臟的保護作用,并且不易出現長期持續(xù)性缺氧對機體導致的缺氧性損傷,因此是一種很有應用前景的心肌保護方式。由于不同的學者針對不同的動物種屬以及不同的研究目標有不一致的間歇性缺氧預處理方案,甚至在個別研究中由于間歇性缺氧嚴重程度以及持續(xù)時間的不一致,導致了截然相反的實驗結果。因此建立簡

3、單、易操作的動物模型與統(tǒng)一、有效的缺氧預處理方案,將有助于我們進一步系統(tǒng)、深入研究間歇性缺氧預處理對于心肌缺血性損傷的保護機制,尤其是在臨床醫(yī)學中的應用前景,具有深遠的意義。
　　缺氧誘導因子-1(HIF-1)是一種機體在缺氧適應性調節(jié)中具有重要作用的轉錄活化因子,通過調控其靶基因可參與血管新生、細胞分化/生存、紅細胞合成、調節(jié)糖代謝、氧轉運等機體對缺血缺氧的適應性反應。HIF-1的表達和激活主要受細胞內氧濃度的調節(jié)及其他信號轉導

4、通路的調節(jié)。通過運用HIF-1的干預性藥物抑制或促進HIF-1的表達,有助于進一步了解間歇性缺氧預處理過程中,HIF-1的表達規(guī)律及其在抗缺血/再灌注損傷心肌保護中的作用機制,將可能為缺氧缺血性疾病的機制及治療提供新的觀點和方法。
　　第一部分，間歇性缺氧預處理的心臟保護作用
　　目的:
　　在已建立的間歇性缺氧預處理大鼠動物模型基礎上,通過手術模擬心肌缺血/再灌注,評價不同間歇性缺氧預處理時相點對心肌缺血/再灌注損傷

5、的保護效應。
　　方法:
　　Wistar大鼠(250±30g)35只,隨機分為常氧對照組(Control)、間歇性缺氧預處理組(IH1d、7d、14d、28d),共5組,每組7只,分別于自制小動物間歇性缺氧實驗艙進行預處理(30s,1min1circle,4h/d)。缺氧終點各組分別行心肌缺血/再灌注實驗(缺血30min后再灌注4h)。實驗終點各實驗組分別檢測心肌梗死范圍(TTC染色法)、心肌細胞凋亡(TUNEL法),并同

6、時測定心肌組織MDA與SOD水平。
　　結果:
　　間歇性缺氧預處理可縮小缺血/再灌注后實驗大鼠心肌梗死范圍、降低心肌細胞凋亡指數、增強心肌抗氧化損傷能力,間歇性缺氧預處理1天后即可呈現上述心肌保護效應,在缺氧預處理7~14天后效應達最大化,至預處理28天保護效應呈弱化趨勢。
　　結論:
　　成功制作間歇性缺氧預處理大鼠模型并通過手術模擬心肌缺血/再灌注損傷,實驗模型成熟可靠,實驗結果體現出間歇性缺氧預處理在心肌

7、缺血/再灌注損傷中的保護作用;本實驗采用的間歇性缺氧預處理模型對于心肌抗缺血/再灌注損傷的保護效應最大化時間點為間歇性缺氧預處理7天。
　　第二部分，HIF-1α調節(jié)劑對間歇性缺氧預處理心臟保護作用的影響
　　目的:
　　研究HIF-1α抑制劑2ME2與增強劑DMOG對大鼠間歇性缺氧預處理心肌保護效應的影響及其對心肌HIF-1α基因表達的作用。
　　方法:
　　Wistar大鼠(250±30g)56只,隨機

8、分為常氧對照組(Control)、間歇性缺氧預處理組(IH)、間歇性缺氧預處理加HIF-1α抑制劑2ME2干預組(IH+2ME2)、間歇性缺氧預處理加HIF-1α增強劑DMOG干預組(IH+DMOG),共4組,每組14只,分別進行間歇性缺氧預處理。預處理終點各組又分為單純預處理組與預處理+缺血/再灌注組(IR),單純預處理各組分別檢測VEGF與HIF-1αmRNA及其蛋白的表達,預處理+缺血/再灌注組分別檢測心肌梗死范圍、心肌細胞凋亡,

9、檢測心肌VEGF與HIF-1αmRNA及其蛋白的表達。
　　結果:
　　1.間歇性缺氧預處理可顯著增強心肌VEGF與HIF-1αmRNA及其蛋白表達;DMOG干預可進一步提高其表達水平;2ME2干預后HIF-1αmRNA表達水平顯著增加,但未檢測到HIF-1α蛋白明顯表達,VEGFmRNA及其蛋白表達均無顯著變化。
　　2.缺血/再灌注實驗后心肌VEGF與HIF-1αmRNA及其蛋白表達均明顯增加,間歇性缺氧預處理組增

10、加更為顯著;間歇性缺氧預處理具有顯著的心肌保護效應,DMOG干預可進一步增強抗缺血/再灌注損傷的心肌保護效應,并呈現出更高的VEGF與HIF-1αmRNA及其蛋白表達水平;2ME2干預組缺血/再灌注后心肌損傷較對照組加重,梗死范圍擴大、細胞凋亡增加,HIF-1αmRNA表達水平顯著增加,但HIF-1α蛋白與VEGFmRNA及其蛋白表達均無顯著變化。
　　結論:
　　間歇性缺氧預處理可提高心肌對缺血/再灌注損傷的耐受,其機制和

11、預處理后VEGF與HIF-1α蛋白表達上調有關,HIF-1α增強劑DMOG可通過進一步上調HIF-1α與VEGF表達水平增強心肌保護效應;HIF-1α抑制劑2ME2可抑制間歇性缺氧預處理及心肌缺血/再灌注后的HIF-1α轉錄活性,由此影響HIF-1α與VEGF蛋白的表達,導致心肌損傷加重。
　　第三部分，抗氧化劑對間歇性缺氧預處理心臟保護作用的影響
　　目的:
　　研究抗氧化劑NAC對大鼠間歇性缺氧預處理心肌保護效應的

12、影響
　　方法:
　　Wistar大鼠(250±30g)56只,隨機分為常氧對照組(Control)、間歇性缺氧預處理組(IH)、NAC干預組(NAC)、間歇性缺氧預處理加NAC干預組(IH+NAC),共4組,每組14只,分別進行間歇性缺氧預處理。預處理終點各組又分為單純預處理組與預處理+缺血/再灌注組,單純預處理各組分別檢測心肌MDA與SOD,檢測VEGF與HIF-1αmRNA及其蛋白的表達,預處理+缺血/再灌注組分別檢測

13、心肌梗死范圍、心肌細胞凋亡、心肌MDA與SOD,VEGF與HIF-1αmRNA及其蛋白的表達。
　　結果:
　　1.間歇性缺氧預處理可降低缺血再灌注損傷后大鼠心肌MDA含量、增加心肌SOD活性,NAC干預亦可增強心肌抗氧化能力,縮小心肌梗死范圍、減少心肌細胞凋亡,在本研究中其心臟保護效應低于單純間歇性缺氧預處理。兩者的心臟保護作用無顯著疊加效應。
　　2.常氧下NAC干預不影響VEGF與HIF-1αmRNA及其蛋白表達