血小板衍生生長因子C腺病毒載體的構(gòu)建及在內(nèi)皮祖細(xì)胞中的表達(dá).pdf_第1頁
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1、目的:構(gòu)建含大鼠血小板衍生生長因子C(PDGF-C)基因的pAD-EGFP-PDGF-C的重組腺病毒表達(dá)載體，體外轉(zhuǎn)染骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)并觀察目的基因蛋白及mRNA表達(dá)。
　　 方法:通過RT-PCR法從plRES2-EGFP-PDGF-C真核表達(dá)載體中獲得PDGF-C目的片段，經(jīng)BP重組插入中間載體pDONR221，再經(jīng)過LR重組到 pAd/CMV/V5-DEST，構(gòu)建pAd-PDGF-C-IRES2-EGFP腺病

2、毒載體。酶切及DNA測(cè)序鑒定后轉(zhuǎn)染HEK293A包裝、純化，測(cè)定病毒滴度后轉(zhuǎn)染大鼠骨髓源性EPCs，應(yīng)用Real-time qPCR、Western blot等方法檢測(cè)PDGF-C蛋白及mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:核酸內(nèi)切酶消化及PCR分析證實(shí)PDGF-C基因成功插入pAD/CMV/V5-DEST腺病毒載體，轉(zhuǎn)染后熒光顯微鏡下觀察可見綠色熒光蛋白表達(dá)，轉(zhuǎn)染48h后Real-time qPCR測(cè)定EPCs中PDGF-C含量明顯提

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