1、血小板衍生因子C（PDGF-C）屬于血小板衍生因子（PDGF）家族的一員。在正常細胞中PDGF-C僅有少量表達，而在癌癥組織中，PDGF-C表達增加，且與腫瘤的增殖、轉移密切相關。PDGF-C可介導細胞發(fā)生多種生物學行為，一般通過結合其受體PDGFα或β發(fā)揮生物學功能，有研究表明PDGF-C可以促進新生血管的形成，可促使腫瘤細胞發(fā)生轉移和增殖。PDGF-C還是一類被大家所認可的可以激活成纖維細胞的細胞因子。在乳腺癌中，腫瘤組織中表達有大

2、量的PDGF-C，且其表達水平與腫瘤的惡性程度呈正相關，而微環(huán)境中成纖維細胞上表達有PDGF-C的受體PDGFα和β，PDGF-C通過與其受體結合，激活受體，活化的受體導致酪氨酸激酶通路激活，介導成纖維細胞活化，參與多種細胞因子的分泌和細胞微環(huán)境的形成。
　　越來越多的研究者認為腫瘤的增殖、轉移及侵襲不僅取決于腫瘤細胞本身，而且取決于其所生長的微環(huán)境。腫瘤微環(huán)境由腫瘤細胞、內皮細胞、免疫細胞、成纖維細胞及細胞外基質等構成。在乳腺癌

3、中，高轉移性乳腺癌患者基質組織中存在大量的活化的成纖維細胞，又稱癌相關的成纖維細胞（CAFs）。作為腫瘤微環(huán)境的重要組成部分，CAFs與乳腺癌的進展息息相關，CAFs可以分泌多種因子介導乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展，促進乳腺癌的浸潤、增殖和轉移。研究者們廣泛認同的如SDF-1/CXCR4（基質細胞衍生因子1/基質細胞衍生因子受體4）生物軸，SDF-1/CXCR4是CAFs分泌的重要因子，CAFs通過分泌SDF-1/CXCR4促進腫瘤的定向轉移和血

4、管的生成。CAFs還可以通過分泌其他因子來促進腫瘤的增殖和轉移，如肝細胞生長因子的（HGF），表皮生長因子（EGF），堿性成纖維細胞生長因子（bFGF），胰島素樣生長因子（IGF）等。CAFs是正常的成纖維細胞經過一些特定的細胞因子的刺激，使之成為活化的成纖維細胞（CAFs）。因此阻斷腫瘤微環(huán)境中CAFs的活化過程能阻斷腫瘤的發(fā)展過程。PDGF-C通過與其受體結合介導成纖維細胞的活化，因此降低PDGF-C的表達也可阻止成纖維細胞的活化。

5、
　　基因序列編碼的蛋白最終得以表達需通過轉錄和翻譯等過程。由于轉錄和翻譯的復雜性，使人類的基因表達調控系統(tǒng)也在多個層面異常復雜。其中基因表達調控非常重要的一個環(huán)節(jié)就是轉錄后水平的調節(jié)。轉錄后水平調節(jié)的最重要的調節(jié)點之一就是mRNA的穩(wěn)定性。HuR是研究的最為成熟的一種RNA結合蛋白，分布于與多種組織中，包括乳腺、脾臟等，HuR通過于mRNA3’UTR區(qū)的AU富集元件結合激活其功能，增強mRNA的穩(wěn)定性。根據本實驗組前期的研究發(fā)現(xiàn)

6、在高轉移性乳腺癌中表達有大量的HuR，而低轉移性乳腺癌中HuR的表達水平較低，文獻也有類似的報道。我們通過生物信息學分析發(fā)現(xiàn)在PDGF-C mRNA的3’UTR區(qū)存在5個AU富集元件，可能是HuR的結合位點。構建PDGF-C mRNA的3’UTR區(qū)載體，轉染入HuR高表達的乳腺癌細胞系MDA-MB-231中，雙熒光素酶基因報告系統(tǒng)檢測發(fā)現(xiàn)HuR可明顯的增加熒光素酶基因的表達，且在第2個和第4個結合位點基因表達增長較明顯，由此可知HuR可

7、作用于PDGF-C mRNA的3’UTR區(qū)調節(jié)PDGFC。在MDA-MB-231細胞中，通過siRNA降低HuR的表達，用western blot技術檢測在HuR不同表達水平下PDGF-C表達水平的變化，研究發(fā)現(xiàn)利用siRNA降低HuR的表達后，PDGF-C的表達也降低。說明HuR可以調節(jié)PDGF-C的表達，且為正向調節(jié)。
　　微小RNA（miR）也是通過轉錄后水平調節(jié)來調節(jié)蛋白的表達。miR是一類小的非編碼RNA分子，貫穿癌癥的

8、整個發(fā)生、發(fā)展過程，多與原癌基因或抑癌基因相關。miR一般通過結合靶基因mRNA的3’UTR區(qū)，降解靶基因的mRNA，從而降低靶基因編碼蛋白的表達。本研究通過生物信息學分析找出可能作用于PDGF-C mRNA的3’UTR區(qū)的miR，通過與PDGF-C mRNA的3’UTR的熒光載體共同轉染入MDA-MB-231細胞中，培養(yǎng)48小時后，雙熒光素酶基因報告系統(tǒng)驗證有生物學功能的miR，研究發(fā)現(xiàn)在分析軟件分析出的17種miR只有miR-382

9、-5p降低讀數(shù)最明顯；將miR-382-5p類似物轉染入MDA-MB-231細胞中，用western blot技術檢測PDGF-C的表達變化，結果發(fā)現(xiàn)MDA-MB-231細胞轉染入miR-382-5p類似物后PDGF-C的表達降低。這就證明miR-382-5p可以作用于PDGF-C mRNA的3’UTR區(qū)，降解PDGF-C的mRNA，使PDGF-C表達下調。同時我們利用RT-PCR技術檢測惡性程度不同的兩種乳腺癌細胞系MDA-MB-23

10、1與MCF-7細胞中miR-382-5p表達情況，結果顯示在轉移性高的MDA-MB-231細胞中miR-382-5p表達低，而在轉移性低的MCF-7細胞中miR-382-5p表達高，符合前面實驗結果的邏輯。
　　HuR和miR-382-5p都可以作用于PDGF-C的3’UTR區(qū)，且同時存在與乳腺癌腫瘤組織中。將乳腺癌細胞系MDA-MB-231細胞分為3組，第1組MDA-MB-231細胞正常培養(yǎng)，第2組給細胞內轉染miR-382-5

11、p類似物，第3組轉染HuR的siRNA，western blot實驗檢測PDGF-C的表達差異。研究發(fā)現(xiàn)PDGF-C在第一組表達最高，第二組稍有降低，第三組顯著降低，說明HuR和miR-382-5p都可在轉錄后水平調節(jié)PDGF-C的表達，且分別為正向和負向調節(jié)。
　　在高轉移性乳腺癌中，PDGF-C可激活腫瘤微環(huán)境中的成纖維細胞，進而促進腫瘤的增殖、轉移。本研究設計一系列實驗，發(fā)現(xiàn)RNA結合蛋白HuR可作用于PDGF-C mRNA