1、金柑(Fortunella crassifolia Swingle)屬蕓香科金柑屬植物，與柑橘屬、枳屬同為蕓香科植物，但金柑開花與發(fā)育過程具有自身特點(diǎn):金柑發(fā)育周期短，其在適宜條件一年可多次開花，當(dāng)年抽生枝梢即可開花，是研究柑橘成花和花發(fā)育的特色材料。本研究以廣西主產(chǎn)品種“融安”金柑為材料，通過高通量測序分析融安金柑花形態(tài)發(fā)育過程中的轉(zhuǎn)錄特征，發(fā)現(xiàn)MADSbox家族基因在花器官發(fā)育過程中起重要調(diào)控作用;通過同源克隆方法獲得37個(gè)融安金柑

2、MADS box基因序列信息，并進(jìn)行了生物信息學(xué)分析和聚類分析;對這些MADS box基因進(jìn)行半定量PCR與熒光定量PCR表達(dá)水平檢測分析，篩選得到12個(gè)特異調(diào)控花器官發(fā)育的關(guān)鍵基因;成功構(gòu)建6個(gè)融安金柑MADS box家族基因植物表達(dá)載體，將其中2個(gè)基因轉(zhuǎn)化擬南芥，獲得轉(zhuǎn)化植株，并對其基因功能進(jìn)行了初步分析和驗(yàn)證;另外，為獲得較為準(zhǔn)確的基因表達(dá)水平定量結(jié)果，對熒光定量內(nèi)參基因進(jìn)行了篩選。本論文將為深入研究融安金柑花發(fā)育與調(diào)控機(jī)制奠定研

3、究基礎(chǔ)，具有一定的理論與應(yīng)用價(jià)值。論文主要獲得研究結(jié)果總結(jié)如下:
　　1、融安金柑花轉(zhuǎn)錄組測序分析
　　通過對金柑花不同時(shí)期樣品顯微切片觀察，分析其在發(fā)育過程中的形態(tài)發(fā)生與分化特點(diǎn)，確定轉(zhuǎn)錄組測序分析及表達(dá)譜分析樣品。利用高通量測序技術(shù)對融安金柑花樣品轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測序，拼接組裝后共獲得共88712條轉(zhuǎn)錄本、46361個(gè)unigene，對轉(zhuǎn)錄組中SNP與SSR分布特點(diǎn)進(jìn)行了初步分析，對應(yīng)甜橙全基因組數(shù)據(jù)庫中的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，確定本實(shí)

4、驗(yàn)中的測序結(jié)果具備較好的代表性與可靠性，可以作為金柑花發(fā)育表達(dá)譜研究的參考序列。
　　2、融安金柑花發(fā)育過程表達(dá)譜分析
　　分析融安金柑花發(fā)育5個(gè)不同階段樣品的表達(dá)譜，通過計(jì)算獲得樣品間的差異表達(dá)基因，對其進(jìn)行了GO功能聚類分析與KEGG代謝途徑聚類分析;并對融安金柑花發(fā)育過程基因轉(zhuǎn)錄特點(diǎn)進(jìn)行了綜合分析，篩選獲得與花發(fā)育相關(guān)的激素、糖代謝、轉(zhuǎn)錄因子等關(guān)鍵調(diào)控途徑，同時(shí)發(fā)現(xiàn)MADSbox家族轉(zhuǎn)錄因子可能在花發(fā)育過程中有重要作用

5、。
　　3、融安金柑不同組織與非生物脅迫處理下基因表達(dá)定量內(nèi)參基因篩選
　　為獲得較準(zhǔn)確的基因表達(dá)水平分析數(shù)據(jù)，運(yùn)用Normfinder、geNorm、hkgFinder和Bestkeeper計(jì)算方法對不同組織與非生物脅迫實(shí)驗(yàn)處理下的16個(gè)備選內(nèi)參基因進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)ACT7在實(shí)驗(yàn)許多處理情況下表達(dá)穩(wěn)定，適合作為融安金柑不同組織與多種非生物脅迫下的基因表達(dá)水平分析內(nèi)參基因，同時(shí)也可采用ACT1+ACT7+EF1-α和ACT1+

6、A CT8多基因復(fù)合形式作為基因表達(dá)水平分析內(nèi)部參照。
　　4、MADS box基因克隆、生物信息學(xué)及表達(dá)分析
　　通過同源克隆方法獲得融安金柑37個(gè)MADS box基因，對核苷酸序列及編碼蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析，聚類分析結(jié)果顯示37個(gè)基因分散于MADS box基因13個(gè)不同亞族類型中。
　　對融安金柑MADS box家族基因進(jìn)一步重點(diǎn)研究，通過半定量檢測37個(gè)MADS box基因在不同組織中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)其中15個(gè)

7、基因與花發(fā)育調(diào)控直接相關(guān);進(jìn)一步對其中12個(gè)基因進(jìn)行熒光定量分析，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)模式各自均具有一定的表達(dá)特點(diǎn)，在融安金柑花發(fā)育調(diào)控過程中各自扮演多樣而重要的角色。
　　5、花發(fā)育相關(guān)MADS box基因轉(zhuǎn)化擬南芥功能驗(yàn)證
　　選取表達(dá)強(qiáng)且功能可能較為重要的FcSEP1、FcSEP1-2、FcGLO、FcAGL11、FcDEFH21和FcAGL61-2構(gòu)建植物表達(dá)載體，F(xiàn)cSEP1-2與FcGLO兩個(gè)基因通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化成功，獲得擬