1、肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)是一種間充質(zhì)來源的多效性細胞因子，通過與其跨膜受體c-met結(jié)合對多種組織器官的生長發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組織修復再生具有重要的生理調(diào)節(jié)功能。HGF已被發(fā)現(xiàn)對肝細胞、上皮細胞、平滑肌細胞等具有顯著的促細胞分裂、運動作用，此外還在血管生成、上皮間充質(zhì)細胞相互間作用中有重要的地位。牙髓組織作為一種外胚間充質(zhì)來源的組織，其損傷的修復源于牙髓組織中的間充質(zhì)細胞的分化能力和組

2、織的修復能力，本課題首次對肝細胞生長因子在牙髓修復中的作用進行研究，初步闡明了HGF在牙髓修復中的作用機制。 本研究采用了免疫組織化學方法和分子生物學方法，利用體外細胞培養(yǎng)技術，對肝細胞生長因子及其受體在正常牙髓組織和細胞中的表達情況進行了研究；采用動物模型研究HGF在修復性牙本質(zhì)形成過程中的表達情況；此外還對HGF對體外培養(yǎng)的人牙髓細胞的生物學作用進行了系統(tǒng)研究，探討其對牙髓細胞生長、分化的影響，并對ERK/MAPK信號通路

3、在其中的作用進行了初步研究。本實驗擬通過系統(tǒng)的實驗研究，對肝細胞生長因子在牙髓修復中的作用機制進行研究，也為牙髓病變的早期修復尋找新的生物學途徑。本實驗共分為四個部分： 第一部分：肝細胞生長因子在牙髓中的表達。采用免疫組化、細胞培養(yǎng)和分子生物學方法研究肝細胞生長因子及其受體在正常牙髓組織、牙髓細胞中的表達情況：發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的牙髓細胞可檢測出HGFmRNA及C-METmRNA的表達，HGF在體外培養(yǎng)的牙髓細胞中胞漿呈陽性表達，胞

4、核陰性表達；在健康離體牙的牙髓組織中成牙本質(zhì)細胞層和血管內(nèi)皮細胞胞漿均呈弱陽性表達。 第二部分：肝細胞生長因子在大鼠修復性牙本質(zhì)中的表達。采用動物模型和免疫組化，研究肝細胞生長因子在大鼠牙髓修復過程中的表達。實驗結(jié)果表明：修復性牙本質(zhì)形初期(3d)，肝細胞生長因子在大鼠牙髓細胞及成牙本質(zhì)細胞胞漿中呈強陽性表達，積分光密度值為8.995±0.943；損傷后15d表達呈陽性(5.624±0.951)，但逐漸減弱，30d(4.07

5、3±0.127)和正常對照組大鼠牙髓細胞及成牙本質(zhì)細胞胞漿中呈弱陽性表達(4.279±0.348)。說明HGF參與了牙髓損傷早期修復及修復性牙本質(zhì)形成的過程。 第三部分：肝細胞生長因子對牙髓細胞生物學作用的研究。采用細胞培養(yǎng)、細胞生物學檢測及分子生物學方法，了解肝細胞生長因子對牙髓細胞生長、分化的影響。 第四部分ERK/MAPK通路在肝細胞生長因子對牙髓細胞作用中的作用研究。采用用100μg/L HGF作用于細胞，ER

6、K/MAPK通路阻斷劑U0126預處理細胞，分析ERK/MAPK信號通路在外源性HGF促進人牙髓細胞分化過程中所起的作用。 結(jié)論：牙髓細胞中有肝細胞生長因子及其受體的表達，在早期修復性牙本質(zhì)形成中的表達明顯上調(diào)。外源性肝細胞生長因子對人牙髓細胞的生長有明顯的促進作用，可縮短牙髓細胞的G1期；增強牙髓細胞的堿性磷酸酶活性，促進堿性磷酸酶和牙本質(zhì)涎磷蛋白在基因和蛋白水平的表達，促進牙髓細胞的分化；MAPK通路參與了肝細胞生長因子對牙