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1、目的:用弱酸洗脫提取CNE細(xì)胞膜表面的腫瘤抗原肽致敏臍血來源的DC<,s>,觀察對CTL的體外誘導(dǎo)作用并評價CTL介導(dǎo)的特異性抗CNE的免疫反應(yīng).方法:從健康臍血中采集單個核細(xì)胞(CBMNC),分離黏附細(xì)胞并于rhGM-CSF1000u/m、rhIL-4 500u/ml條件下培養(yǎng);檢測DC表型.以弱酸(pH3.3)處理CNE細(xì)胞5分鐘,洗脫其表面的HLA-I類抗原肽,流式細(xì)胞儀檢測洗脫率;OASIS-HLB小柱提取純化洗脫的抗原肽,致敏
2、DC<,s>;致敏DC<,s>與異體外周血T淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)產(chǎn)生CTL,<'3>H-TdR摻入法測定細(xì)胞的刺激指數(shù);分別以DC<,s>、未經(jīng)DC<,s>激活的混合T淋巴細(xì)胞及DC<,s>誘導(dǎo)的CTL作效應(yīng)細(xì)胞對CNE細(xì)胞進(jìn)行體外殺傷實驗.MTT法檢測殺傷率.結(jié)果:CBMNC貼壁獲得的黏附細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞因子序貫培養(yǎng)可高表達(dá)DC表面抗原CD86、CD1α、CD40、HLA-DR.弱酸可以洗脫CNE細(xì)胞膜表面絕大部分與MHC- I類分子結(jié)合的腫瘤
3、抗原肽,經(jīng)此抗原肽致敏的DC<,s>,在體外可以激發(fā)特異性識別CNE細(xì)胞抗原肽的CD<,8><'+>CTL細(xì)胞株的增殖,產(chǎn)生特異性抗CNE的免疫反應(yīng).未致敏DC<,s>組和T細(xì)胞組無此反應(yīng).弱酸洗脫后的CNE細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)48小時,其表面的HLA- I類腫瘤抗原肽重新表達(dá).結(jié)論:CBMNC貼壁獲得黏附細(xì)胞后經(jīng)細(xì)胞因子序貫培養(yǎng)可獲得DC<,s>.弱酸洗脫提取的CNE腫瘤細(xì)胞膜表面的腫瘤抗原肽致敏的DC<,s>在體外能夠誘導(dǎo)高效而特異的抗鼻咽
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