1、玉米轉(zhuǎn)錄因子ABP9（ABRE binding protein9）是通過(guò)酵母單雜交的方法，以活性氧清除基因Cat1（Catalase1）啟動(dòng)子的順式元件ABRE2為目標(biāo)序列，從玉米自交系齊319授粉后17天的幼胚cDNA文庫(kù)中篩選得到的能夠與ABRE2結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子。ABP9全長(zhǎng)cDNA序列共1510 bp，其中開(kāi)放閱讀框（ORF）為1158 bp，編碼358個(gè)氨基酸。據(jù)此cDNA序列，本實(shí)驗(yàn)室前期通過(guò)PCR法克隆了ABP9編碼區(qū)的基因

2、組序列，還通過(guò)PCR步移法克隆了ABP9起始ATG上游2006 bp的啟動(dòng)子序列。研究表明，ABP9基因的表達(dá)受ABA、干旱、H2O2和高鹽脅迫等非生物逆境的誘導(dǎo)；ABP9過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因擬南芥能大幅度提高植株對(duì)干旱、低溫、高鹽等多種非生物逆境的耐受性，在逆境下，轉(zhuǎn)ABP9擬南芥能提高植株的光合能力，具有更強(qiáng)的ROS清除能力，且表現(xiàn)出ABA和氣孔關(guān)閉響應(yīng)的高敏感性。這些結(jié)果說(shuō)明ABP9基因在植物抗逆性過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。盡管如此，對(duì)于A

3、BP9的認(rèn)知和應(yīng)用還有待于進(jìn)一步研究。存在的科學(xué)問(wèn)題有：ABP9基因完整且準(zhǔn)確的基因組序列和染色體定位信息；ABP9在玉米整個(gè)生育期的時(shí)空表達(dá)特異性以及轉(zhuǎn)基因功能等。本文第一部分是對(duì)已構(gòu)建好的玉米自交系齊319的細(xì)菌人工染色體（Bacterial artificial chromosome，BAC）文庫(kù)中含有ABP9基因的單克隆進(jìn)行篩選，通過(guò)測(cè)序和比對(duì)來(lái)獲得ABP9準(zhǔn)確的基因組序列和染色體定位信息；第二部分是通過(guò)構(gòu)建Pabp9-GUS載

4、體并轉(zhuǎn)化玉米以研究該基因在玉米的整個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中的時(shí)空表達(dá)特異性；第三部分是將ABP9基因與不同強(qiáng)度啟動(dòng)子進(jìn)行融合以研究其在轉(zhuǎn)基因玉米中表型及抗逆能力，以期篩選到驅(qū)動(dòng)ABP9適量表達(dá)的啟動(dòng)子，用以培育生長(zhǎng)發(fā)育和抗逆性俱佳的玉米新品種。主要研究成果如下:
　　1、應(yīng)用PCR分級(jí)篩選法從玉米自交系齊319的BAC文庫(kù)中篩選到19個(gè)含有ABP9基因的一級(jí)陽(yáng)性混池；從BAC-103，BAC-159兩個(gè)一級(jí)陽(yáng)性混池中篩選到4個(gè)含有ABP9

5、基因的陽(yáng)性單克隆，分別是：BAC-103-C3、BAC-103-L5、BAC-159-D1、BAC-159-E1。
　　2、陽(yáng)性單克隆BAC-103-C3經(jīng)全序列測(cè)定獲得了ABP9基因準(zhǔn)確的基因組序列及其旁側(cè)基因組序列；序列比對(duì)后將ABP9基因定位于玉米自交系Mo17基因組的3號(hào)染色體上。
　　3、對(duì)ABP9基因啟動(dòng)子Pabp9驅(qū)動(dòng)GUS表達(dá)的轉(zhuǎn)基因玉米生育期各組織器官的GUS染色和GUS相對(duì)酶活進(jìn)行分析，ABP9基因在種子

6、萌發(fā)24小時(shí)（G0）的胚芽和胚根、播種6天(G1)的整個(gè)植株，V18期、R1期的雌穗及授粉第6、第8天的籽粒種皮中表達(dá)最強(qiáng)，其他時(shí)期的組織器官中表達(dá)較弱或不表達(dá)，推測(cè)該基因是一個(gè)組織特異性表達(dá)的基因，并且參與玉米籽粒發(fā)育早期的調(diào)控。
　　4、對(duì)水稻α-微管蛋白基因Os-TubA4啟動(dòng)子Postuba4驅(qū)動(dòng)ABP9表達(dá)的轉(zhuǎn)基因玉米干旱逆境下的光合參數(shù)進(jìn)行測(cè)定，轉(zhuǎn)基因株系比非轉(zhuǎn)基因株系的光合能力和水分利用效率更強(qiáng)，說(shuō)明Postuba4