1、慢性充血性心力衰竭(CHF)是各種心臟疾病發(fā)展的終末階段,其發(fā)病率和病死率隨著全球老齡化的不斷加劇逐年增多。目前雖有多種藥物可改善心衰患者癥狀,但真正能夠阻斷甚至逆轉(zhuǎn)心衰進(jìn)程的療法或藥物尚未問(wèn)世。因此,關(guān)于心衰的發(fā)病機(jī)制和治療的研究仍在不斷深入。
　　 他汀類(lèi)藥物是臨床上應(yīng)用廣泛的降脂藥,有研究表明,他汀對(duì)心衰患者可能有益。本研究以培養(yǎng)的新生SD大鼠心肌成纖維細(xì)胞(CFs)為研究對(duì)象,采用比色法、流式細(xì)胞術(shù)、Western Bl

2、ot和細(xì)胞免疫熒光染色,共聚焦顯微鏡掃描技術(shù)等實(shí)驗(yàn)方法,觀察了醛固酮(Ald)誘導(dǎo)的心臟成纖維細(xì)胞增殖、DNA合成、膠原合成及細(xì)胞周期變化,及可能的分子機(jī)制;同時(shí)觀察HMG-CoA還原酶抑制劑阿托伐他汀(Ato)對(duì)Ald誘導(dǎo)的心臟成纖維細(xì)胞增殖、DNA合成、膠原合成及細(xì)胞周期變化的影響及其可能的分子機(jī)制;還應(yīng)用比色法和形態(tài)學(xué)觀察、流式細(xì)胞術(shù)等凋亡檢測(cè)方法,分別測(cè)定了Ato和瑞舒伐他汀(Ros)對(duì)CFs增殖和凋亡的影響;并對(duì)脂溶性的Ato

3、和水溶性的Ros對(duì)心肌成纖維的抑制作用進(jìn)行了比較。為闡明心肌纖維化的發(fā)生機(jī)制,防治心肌纖維化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要包括以下五部分:
　　 第一部分醛固酮對(duì)SD乳鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成的促進(jìn)作用及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
　　 目的:研究Ald對(duì)SD乳鼠CFs增殖和膠原合成的促進(jìn)作用及其作用機(jī)制。
　　 方法:用胰酶消化法分離并培養(yǎng)新生SD大鼠的CFs,以Ald誘導(dǎo)其增殖和膠原合成,并加入螺內(nèi)酯(Spi)干預(yù),采

4、用MTT法檢測(cè)CFs的增殖,Brdu法檢測(cè)CFs的DNA合成,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CFs細(xì)胞周期,羥脯氨酸試劑盒檢測(cè)CFs膠原合成,免疫熒光染色、激光共聚焦顯微鏡掃描半定量p-ERK1/2、p-AKT、Cyclin D1、Cyclin E2的表達(dá)變化。
　　 結(jié)論:外源性Ald可誘導(dǎo)CFs增殖、DNA合成和膠原合成,發(fā)揮其致心肌纖維化作用,此作用與其通過(guò)ERK1/2和Akt通路上調(diào)周期蛋白Cycin D1和Cyclin E2表達(dá)有關(guān)。

5、
　　 第二部分阿托伐他汀對(duì)醛固酮誘導(dǎo)的SD乳鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成的抑制作用及其機(jī)制探討
　　 目的:研究Ato對(duì)Aid誘導(dǎo)的SD乳鼠CFs增殖和膠原合成的抑制作用及其作用的分子機(jī)制。
　　 方法:用胰酶消化法分離并培養(yǎng)新生SD大鼠的CFs,以Ald誘導(dǎo)其增殖和膠原合成,并加入Ato干預(yù),采用MTT法檢測(cè)CFs的增殖,Brdu法檢測(cè)CFs的DNA合成,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CFs周期,羥脯氨酸試劑盒檢測(cè)CFs膠

6、原合成,免疫熒光染色,激光共聚焦顯微鏡掃描和Western Blot半定量p-ERK1/2、p-AKT、Cyclin D1、Cyclin E2的表達(dá)變化。
　　 結(jié)論:Ato可明顯抑制Ald誘導(dǎo)的CFs增殖、DNA合成和膠原合成,抑制Ald的致心肌纖維化作用,此作用與其通過(guò)抑制ERK1/2和Akt通路,進(jìn)而抑制周期蛋白Cycin D1和Cyclin E2表達(dá)有關(guān)。
　　 第三部分阿托伐他汀對(duì)SD乳鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖的抑

7、制作用和對(duì)凋亡的誘導(dǎo)作用
　　 目的:研究Ato對(duì)SD乳鼠CFs增殖的抑制作用和凋亡的誘導(dǎo)作用。
　　 方法:用胰酶消化法分離并培養(yǎng)新生SD大鼠的CFs,并加入Ato干預(yù),采用MTT法檢測(cè)CFs的增殖,Brdu法檢測(cè)CFs的DNA合成,倒置生物顯微鏡和熒光顯微鏡檢測(cè)凋亡細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CFs凋亡率。
　　 結(jié)論:10-7～104mol/L Ato不僅可抑制CFs增殖和DNA合成,還可時(shí)間和劑量依賴(lài)性的誘導(dǎo)

8、CFs凋亡。
　　 第四部分瑞舒伐他汀對(duì)sD乳鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖的抑制作用和對(duì)凋亡的誘導(dǎo)作用
　　 目的:研究Ros對(duì)SD乳鼠CFs增殖的抑制作用和凋亡的誘導(dǎo)作用。
　　 方法:用胰酶消化法分離并培養(yǎng)新生SD大鼠的CFs,并加入Ros干預(yù),采用MTT法檢測(cè)CFs的增殖,Brdu法檢測(cè)CFs的DNA合成,倒置生物顯微鏡和熒光顯微鏡檢測(cè)凋亡細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CFs凋亡率。
　　 結(jié)論:10-7～10-

9、5mol/L Ros不僅可抑制CFs增殖和DNA合成,還可以時(shí)間和劑量依賴(lài)性的誘導(dǎo)CFs凋亡。
　　 第五部分阿托伐他汀和瑞舒伐他汀對(duì)SD乳鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖抑制作用比較
　　 目的:比較Ato和Ros對(duì)SD乳鼠CFs增殖的抑制作用和凋亡的誘導(dǎo)作用。
　　 方法:用胰酶消化法分離并培養(yǎng)新生SD大鼠的CFs,并加入Ato或Ros干預(yù),采用MTT法檢測(cè)CFs的增殖,Brdu法檢測(cè)CFs的DNA合成,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)C