1、研究背景：目前認為，左心室肥厚是增加原發(fā)性高血壓患者病殘率和病死率的一個重要的獨立危險因素。心臟成纖維細胞的增殖及心肌細胞肥大是導(dǎo)致心肌肥厚重要的病理生理基礎(chǔ)。高血壓心肌纖維化可以引起心室功能不全、冠脈儲備不良和嚴重的室性心律失常，使高血壓患者發(fā)生心力衰竭和猝死的危險顯著增加。因此，目前如何治療高血壓心肌纖維化的問題引起國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。拉西地平是一種新型的二氫吡啶類鈣拮抗劑，它在平穩(wěn)降壓的同時還有效地保護靶器官，而且可顯著降低高血壓所

2、致心血管事件和心血管病的死亡率，是一類具有廣闊應(yīng)用和發(fā)展前景的重要的降壓藥物。臨床觀察顯示,拉西地平對逆轉(zhuǎn)高血壓左室肥厚也有一定療效。但是，拉西地平對CFs增殖有何影響，能否調(diào)控CFs膠原合成的問題，目前尚不十分清楚。
　　研究目的：本課題觀察拉西地平對血管升壓素(AVP)誘導(dǎo)大鼠心臟成纖維細胞(CFs)增殖的影響；研究拉西地平調(diào)控AVP誘導(dǎo)大鼠心肌間質(zhì)Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達及其蛋白表達的作用；探討拉西地平干預(yù)對大鼠CFs的ER

3、K1/2磷酸化的調(diào)控作用；旨在闡明拉西地平對心臟重構(gòu)的作用及其可能的機制，為防治高血壓提供理論依據(jù)和新的方法，同時也為拉西地平的臨床應(yīng)用提供一個新的途徑。
　　研究方法：本研究以乳鼠CFs為研究對象，AVP誘導(dǎo)建立CFs增殖模型，采用MTT比色法測定細胞數(shù)目，流式細胞儀技術(shù)分析CFs周期，RT-PCR和ELISA技術(shù)測定CFs的Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達和細胞培養(yǎng)上清中的膠原蛋白含量，用蛋白免疫印跡法測定總細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（t-ERK

4、）1/2和磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（p-ERK）1/2在細胞內(nèi)的表達。
　　研究結(jié)果：(1)10-7mol/LAVP干預(yù)24h后，CFs的A490值(0.232±0.013)較對照組(0.132±0.008)明顯增高(P<0.01)。在10-9～10mol/L拉西地平和10-7mol/L-6AVP共同干預(yù)下，拉西地平可呈濃度依賴性地下調(diào)CFs的A490值，分別為0.216±0.01、0.203±0.01、0.176±0.01和0.

5、160±0.01，均顯著低于AVP組(P<0.01)。10-7mol/L拉西地平單獨作用組CFs的A490值(0.122±0.010)也較對照組明顯降低并有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。(2)細胞周期分析顯示，AVP組CFs在S期的百分率和增值指數(shù)(PI)分別為13.06±0.83和21.70±1.55，與對照組(分別為4.60±0.60和8.97±1.56)比較明顯增高并有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。在10-7mol/L拉西地平干預(yù)下，

6、細胞在S期的百分率(8.84±0.80)和PI(15.46±1.84)較AVP組明顯降低并有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。10-7mol/L的拉西地平和AVP共同作用后，細胞周期中S期的百分率(8.84±0.80)和PI(15.46±1.84)較AVP組明顯降低并有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，但仍高于對照組并有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。10-7mol/L拉西地平單獨干預(yù)組CFs在S期的百分率(4.07±0.41)和PI(6.77±0.7

7、0)與對照組比較，也明顯降低并有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。(3)AVP組CFs的Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達水平分別為1.42±0.06和1.03±0.04，與對照組(1.01±0.05和0.73±0.04)比較均明顯地增高并有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；而拉西地平可濃度依賴性下調(diào)AVP誘導(dǎo)CFs的Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達，其中10-7mol/L拉西地平干預(yù)組CFs的Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達水平分別為1.19±0.04和0.83±0.05

8、，較AVP組明顯降低，但仍高于對照組并有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；10-7mol/L拉西地平單獨作用組CFs的Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達水平分別為0.86±0.04和0.61±0.04，也較對照組明顯降低并有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。(4)在AVP作用的基礎(chǔ)上，分別加入10-9～10mol/L拉西地平干預(yù)后，隨著拉西地平濃度的增高，Ⅰ型膠原mRNA表達水平呈遞減趨勢，分別為1.36±0.03、1.28±0.05、1.18±0.02和1

9、.10±0.02；Ⅲ型膠原也呈遞減趨勢，分別為0.99±0.03、0.92±0.02、0.85±0.01和0.78±0.02，與AVP組Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達水平(1.44±0.06和1.07±0.03)比較均明顯地降低，其中10-9mol/L拉西地平干預(yù)組與AVP組有差異(P<0.05)，10-8-6～10mol/L拉西地平干預(yù)組與AVP組比較有顯著差異(P<0.01)。(5)AVP組CFs培養(yǎng)上清中Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白含量分別為86.

10、40±1.44和40.37±2.92ng/mL，與對照組(17.46±1.56和10.33±2.40ng/mL)比較明顯地增高并有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；給予10-9-6～10mol/L拉西地平干預(yù)后，隨著拉西地平濃度的增高，-6CFs培養(yǎng)上清中Ⅰ型膠原蛋白含量呈遞減趨勢，分別為76.97±2.91、58.02±2.81、40.71±3.88和29.05±2.93ng/mL，較AVP組明顯地降低并有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；Ⅲ型膠

11、原蛋白含量也呈遞減趨勢，分別為35.40±2.73、25.17±3.97、18.01±0.64和15.73±2.32ng/mL，也較AVP組明顯地降低,其中10-9mol/L拉西地平干預(yù)組與AVP組有差異(P<0.05)，10-8～10mol/L拉西地平干預(yù)組與AVP組-6比較有顯著差異(P<0.01)；10-7mol/L拉西地平單獨作用組CFs的Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白含量分別為9.12±1.94和4.92±0.79ng/mL，也較對照組降低

12、，并統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。(5)AVP組CFs的p-ERK1/2表達明顯高于對照組，10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L拉西地平干預(yù)組心肌細胞p-ERK1/2表達與AVP組比較呈濃度依賴性降低（P<0.01）；CFs的t-ERK1/2表達在各組沒有明顯的差異（p＞0.05）.
　　研究結(jié)論：(1)拉西地平可以濃度依賴的抑制AVP誘導(dǎo)CFs細胞數(shù)目的增加，降低細胞S期百分率和PI，提示

13、拉西地平能夠抑制AVP誘導(dǎo)CFs的增殖。(2)拉西地平以濃度依賴的方式抑制AVP誘導(dǎo)CFs的Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達和蛋白合成，提示拉西地平能夠抑制AVP誘導(dǎo)的CFs膠原合成。(3)AVP可誘導(dǎo)CFs的ERK1/2的磷酸化,在以不同濃度拉西地平干預(yù)后，隨著拉西地平濃度的升高，AVP誘導(dǎo)CFs的p-ERK1/2表達呈下降趨勢；而t-ERK1/2的表達在各組中的變化不明顯，提示拉西地平抑制AVP誘導(dǎo)的CFs增殖可能與其抑制ERK1/2的磷酸化有