1、本文研究目的：探討腫瘤壞死因子-alpha(TNF-α)聯(lián)合氧化苦參堿(OM)對(duì)肺成纖維細(xì)胞增殖的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的研究，從細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的角度探討塵肺發(fā)病機(jī)制，為治療塵肺提供科學(xué)依據(jù)。 研究方法：對(duì)SD大鼠乳鼠肺成纖維細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)，傳至4-5代后，用不同濃度的TNF-α聯(lián)合不同濃度OM刺激成纖維細(xì)胞，培養(yǎng)一定的時(shí)間，用MTT比色法檢測(cè)TNF-α對(duì)成纖維細(xì)胞增殖的影響；用Western blot技術(shù)檢測(cè)成纖維細(xì)胞膜G<,

2、s>蛋白的表達(dá)；用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)測(cè)定成纖維細(xì)胞內(nèi)蛋白激酶C(PKC)和核轉(zhuǎn)錄因子-кB(NF-кB)的表達(dá)。 研究結(jié)果： 1.細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：當(dāng)不同濃度的TNF-α作用于成纖維細(xì)胞時(shí)，在不同時(shí)間點(diǎn)，各實(shí)驗(yàn)組光密度(OD)值均較對(duì)照組顯著增高(P<0.05)。在4h時(shí)間點(diǎn)，10ng/mlTNF-α組OD值較5ng/ml和20ng/mlTNF-α組高，20ng/mlTNF-α組OD值較5ng/mlTNF-α組高，差異

3、均有顯著性(P<0.05)。在24h時(shí)間點(diǎn)，隨著TNF-α劑量的增加，各實(shí)驗(yàn)組OD值也明顯升高，且各組間差異均有顯著性(P<0.05)。其中10ng/ml和20ng/mlTNF-α組0D值隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯增高。 2.Western blot結(jié)果顯示：當(dāng)不同濃度的TNF-α作用于成纖維細(xì)胞時(shí)，在不同時(shí)間點(diǎn)，各實(shí)驗(yàn)組間G<,s>蛋白的表達(dá)均無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 3.PKC結(jié)果顯示：當(dāng)單獨(dú)TNF-α作用成纖維細(xì)胞時(shí)，在

4、不同時(shí)間點(diǎn)，各實(shí)驗(yàn)組PKC表達(dá)陽(yáng)性單位數(shù)均較對(duì)照組高，其中10ng/mlTNF-α組PKC表達(dá)陽(yáng)性單位數(shù)較5ng/ml和20ng/mlFNF-α組高，其差異均具有顯著性(P<0.05)。在24h時(shí)間點(diǎn)，20ng/mlTNF-α組PKC表達(dá)陽(yáng)性單位數(shù)高于5ng/mlTNF-α組，較4h時(shí)間點(diǎn)相同劑量組顯著增高(P<0.05)。當(dāng)TNF-α聯(lián)合0M作用于成纖維細(xì)胞時(shí)，各實(shí)驗(yàn)組PKC表達(dá)陽(yáng)性單位數(shù)值均明顯高于對(duì)照組。隨著OM劑量的增加，成纖維

5、細(xì)胞PKC表達(dá)陽(yáng)性單位數(shù)呈現(xiàn)逐漸降低趨勢(shì)。10ng/ml TNF-α聯(lián)合400μg/ml和800μg/mlOM組成纖維細(xì)胞PKC表達(dá)陽(yáng)性單位數(shù)明顯低于10ng/mlTNF-α組，其中10ng/mlTNF-α聯(lián)合800μg/m10M組成纖維細(xì)胞PKC表達(dá)陽(yáng)性單位數(shù)較10ng/mlTNF-α聯(lián)合200μg/m10M組明顯降低(P<0.05)。 4.NF-кB結(jié)果顯示：當(dāng)TNF-α單獨(dú)作用于成纖維細(xì)胞時(shí)，在不同時(shí)間點(diǎn)，各實(shí)驗(yàn)組成纖維細(xì)

6、胞NF-кB表達(dá)陽(yáng)性單位數(shù)均較對(duì)照組明顯增高，隨著TNF-α劑量的增加，NF-кB表達(dá)陽(yáng)性單位數(shù)均呈現(xiàn)增高趨勢(shì)。在4h時(shí)間點(diǎn)，20ng/mlTNF-α組NF-кB表達(dá)陽(yáng)性單位數(shù)明顯高于5ng/ml和10ng/mlTNF-α組；在24h時(shí)間點(diǎn)，10ng/ml和20ng/mlTNF-α組NF-кB表達(dá)陽(yáng)性單位數(shù)均較5ng/mlTNF-α組顯著增高，各實(shí)驗(yàn)組成纖維細(xì)胞NF-кB表達(dá)陽(yáng)性單位數(shù)均較4h時(shí)間點(diǎn)相同劑量組低，其差異均有顯著性(P<0

7、.05)。當(dāng)TNF-α聯(lián)合OM作用于成纖維細(xì)胞時(shí)，各實(shí)驗(yàn)組NF-кB表達(dá)陽(yáng)性單位數(shù)明顯高于空白對(duì)照組。10ng/mlTNF-α聯(lián)合400μg/m10M組NF-кB表達(dá)陽(yáng)性單位數(shù)顯著低于10ng/mlTNF-α組，10ng/mlTNF-α聯(lián)合200μg/ml和800μg/m10M組(P<0.05)。10ng/mlTNF-α聯(lián)合800μg/m10M組NF-кB表達(dá)陽(yáng)性單位數(shù)明顯高于其余各實(shí)驗(yàn)組(P<0.05)。 研究結(jié)論：