1、目的：舌鱗癌淋巴道轉移是口腔惡性腫瘤的研究熱點之一，與臨床預后密切相關，其中基質金屬蛋白酶家族在舌鱗癌侵襲、轉移中扮演重要角色，而RECK基因可以通過抑制MMP-2,9的活性阻礙、抑制癌細胞轉移，構成影響癌細胞轉移的調控體系。本研究利用臨床病理檢測結合淋巴道轉移動物模型，旨在分析RECK基因調節(jié)MMPs的相互關系，闡明RECK基因調節(jié)在舌鱗癌淋巴道轉移中的作用及臨床意義；探討舌鱗癌轉移中RECK基因調控機制；在此基礎上，進一步開展板藍根

2、組酸抑制舌鱗癌細胞轉移的實驗研究與機理探討，尋找低毒、高效的癌細胞轉移抑制劑，拓寬舌鱗癌的治療方法，提高治愈率。 方法：首先以舌鱗癌患者的臨床標本與舌鱗癌淋巴道轉移動物模型為研究對象，采用免疫組化、WestemBlot技術，檢測RECK蛋白、MMP-2、9蛋白的表達水平，并通過統(tǒng)計學手段分析RECK基因表達與舌鱗癌臨床病理特征的相關性以及和MMP-2、9基因的相互關系，繼而進行板藍根組酸抑制舌鱗癌細胞轉移的體內、外實驗，采用Tr

3、answell培養(yǎng)體系進行板藍根組酸干預舌鱗癌細胞侵襲、趨化等轉移特性的檢測，應用Western Blot與：Real-Time PCR技術檢測板藍根組酸干預后，舌鱗癌細胞RECK基因與MMP-2、9基因在mRNA和蛋白的表達水平。通過建立綠色熒光蛋白標記舌鱗癌細胞淋巴道轉移的動物模型，進行板藍根組酸干預舌鱗癌轉移實驗，通過流式細胞術檢測淋巴結中轉移的舌鱗癌細胞數(shù)，反映抑制效應，同時進行Western Blot檢測RECK蛋白及MMP-

4、2、9蛋白的表達水平。 結果：舌鱗癌臨床標本檢測，發(fā)現(xiàn)RECK蛋白表達水平與舌鱗癌的浸潤范圍、淋巴結轉移有密切關系，而且RECK蛋白表達水平與MMP-9表達呈顯著負相關;動物模型體內實驗，發(fā)現(xiàn)淋巴結轉移中舌鱗癌細胞的RECK蛋白表達水平顯著降低，而MMP-2、9蛋白水平明顯升高。經(jīng)板藍根組酸干預治療，可明顯抑制舌鱗癌細胞趨化運動和侵襲穿透能力，且具有濃度依賴性，同時還發(fā)現(xiàn)MMP-2、9在mRNA水平表達和蛋白分泌等方面均受到明

5、顯抑制，而RECK基因tuRNA與蛋白水平明顯上調；在舌鱗癌淋巴道轉移動物模型中，在板藍根組酸干預下，淋巴結中GFP陽性的標記舌鱗癌細胞數(shù)量明顯下降，進一步發(fā)現(xiàn)該群細胞RECK蛋白水平回升與MMP-2、9表達水平明顯降低。 結論：舌鱗癌侵襲和轉移過程中，RECK基因起到明顯的抑制作用，其抑制機理可能與下調MMP-2、MMP-9的表達有關。在體外、體內實驗中，板藍根組酸可以抑制舌鱗癌細胞的侵襲、轉移能力，并且與上調RECK蛋白表達