1、背景和目的；腫瘤獲得血供是腫瘤形成過程中一個(gè)極為重要的階段和條件，腫瘤內(nèi)新血管的生成，依賴于內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移。以往認(rèn)為，腫瘤的血管生成是通過分化完全的血管內(nèi)皮細(xì)胞從業(yè)已存在的血管中增殖、遷徙和再塑而成；但近來的研究發(fā)現(xiàn)：腫瘤的血管生成也有骨髓干細(xì)胞的參與。骨髓里的干細(xì)胞在某些因子，例如：粒細(xì)胞集落刺激因子(granulocytecolony-stimulatingfactor,G-CSF)、血小板反應(yīng)蛋白等的刺激下，分化成為血管內(nèi)皮

2、前體細(xì)胞(endothelialprogenitorcells,EPC)；EPC又在其他因子的作用下進(jìn)入外周血循環(huán)，在生理和病理的血管生成處分化成血管內(nèi)皮細(xì)胞。因此，現(xiàn)在認(rèn)為：腫瘤的血管生成過程中，既有局部血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、再塑，又有來自骨髓的血管內(nèi)皮前體細(xì)胞的分化參與。 臨床上，在最大耐受劑量(maximumtolerateddose，MTD)化療的間歇期，促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin,EPO)和G-C

3、SF等藥物常用來促使病人從MTD化療導(dǎo)致的骨髓抑制中恢復(fù)，但在一些臨床試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)：MTD化療后使用這些刺激因子的病人反而預(yù)后更差，有學(xué)者推測(cè)，這是因?yàn)镋PO和G-CSF等在動(dòng)員骨髓造血前體細(xì)胞進(jìn)入外周血并進(jìn)而分化為成熟的紅細(xì)胞和白細(xì)胞的同時(shí)，也加速了EPC的動(dòng)員，促進(jìn)了腫瘤的血管生成，導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)。 基于以上理論，本實(shí)驗(yàn)以C57BL/6小鼠為研究對(duì)象，先給予每組小鼠不同劑量的環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)化

4、療，第7天對(duì)其中接受最大耐受劑量化療的一組小鼠行骨髓移植，然后，第12天在每組小鼠體內(nèi)接種Lewis肺癌細(xì)胞，觀察Lewis肺癌的生長(zhǎng)情況，通過檢測(cè)腫瘤組織中的微血管密度(microvesseldensity,MVD)和增殖核抗原(proliferatingcellsnuclearantigen,PCNA)，來分析化療引起的不同程度的機(jī)體損傷和骨髓對(duì)Lewis肺癌血管生成及生長(zhǎng)的影響，為通過阻止腫瘤血管形成來抑制腫瘤生長(zhǎng)的治療策略的進(jìn)一

5、步發(fā)展提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法；1小鼠分組及給藥將C57BL/6小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只：(1)MTD化療組CTX150mg/kgIPd1,3,5，(2)MTD化療+骨髓移植組CTX150mg/kgIPd1,3,5,第7天接受骨髓移植，(3)小劑量化療組CTX10mg/kgIPd1,3,5,7,9,11，(4)對(duì)照組N-S0.15mLIPd1,3,5。 2骨髓移植獲取供體C57BL/6小鼠的骨髓，調(diào)整有核細(xì)胞濃度至10×

6、106/mL，MTD化療+骨髓移植組小鼠于化療第7天經(jīng)尾靜脈注射0.3mL的細(xì)胞懸液。 3接種腫瘤細(xì)胞于化療第12天獲取Lewis肺癌腫瘤細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度至5×106/mL，在每只小鼠右腋窩內(nèi)側(cè)皮下注射0.2mL細(xì)胞懸液。 4小鼠一般狀況及外周血白細(xì)胞數(shù)目變化在實(shí)驗(yàn)過程中觀察小鼠的體重、皮毛變化，活動(dòng)和反應(yīng)情況，每隔一天測(cè)量一次體重；在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)小鼠外周血白細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并繪制白細(xì)胞數(shù)目變化曲線。 5觀察腫瘤

7、生長(zhǎng)情況于接種后第6天用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的最長(zhǎng)徑(a)和與其垂直的最短徑(b)，以后每天于同一時(shí)間測(cè)量，按公式V=0.52ab2計(jì)算瘤塊體積，繪制體重及體積變化曲線。 6實(shí)驗(yàn)終止時(shí)，剝離每只小鼠的皮下移植瘤，采用免疫組化S-ABC法測(cè)定腫瘤組織中微血管密度(MVD)和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)指數(shù)。 7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用方差分析和S-N-K檢驗(yàn)。以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

8、 結(jié)果；1.MTD化療后可觀察到小鼠皮毛失去光澤，行動(dòng)遲緩，反應(yīng)遲鈍，外周血白細(xì)胞數(shù)和體重明顯下降，與單純MTD化療組小鼠相比，MTD化療+骨髓移植組小鼠的一般狀況恢復(fù)較快，小劑量化療組和對(duì)照組小鼠一般狀況無明顯改變。 2.小劑量化療組和對(duì)照組小鼠在接種后第6天即可測(cè)到腫瘤，且腫瘤生長(zhǎng)較快；MTD化療+骨髓移植組小鼠在接種后第7天可測(cè)到，腫瘤初期生長(zhǎng)較慢，后期生長(zhǎng)較快，單純MTD化療組小鼠在接種后第8天可測(cè)到腫瘤，腫瘤生長(zhǎng)

9、較MTD化療+骨髓移植組慢，實(shí)驗(yàn)終止時(shí)皮下移植瘤的體積仍小于MTD化療+骨髓移植組小鼠的皮下移植瘤體積。 3.單純MTD化療組的MVD值為17.85±4.06，MTD化療+骨髓移植組、小劑量化療組和對(duì)照組的MVD值分別為33.46±3.25，34.11±4.32，36.91±3.03，MTD化療組的MVD值與其余三組的MVD值相比有顯著性差異(P＜0.05)；小劑量化療組、MTD化療+骨髓移植組和對(duì)照組的MVD值相比無顯著性差異

10、(P＞0.05)。 4.單純MTD化療組的PCNA指數(shù)為41.03±6.03，MTD化療+骨髓移植組、小劑量化療組和對(duì)照組的PCNA指數(shù)分別73.45±5.63，75.97±5.64，78.61±5.28，MTD化療組的PCNA指數(shù)與其余三組的PCNA指數(shù)相比有顯著性差異(P＜0.05)；MTD化療+骨髓移植組、小劑量化療組和對(duì)照組的PCNA指數(shù)相比無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論；1.MTD化療可引起較明顯的毒性反