1、研究目的:腦創(chuàng)傷后顱內炎癥反應促進繼發(fā)性腦損傷的發(fā)展、腦水腫的形成、顱內壓的增高、神經元的凋亡以及神經功能的缺失，顯著惡化原發(fā)性損傷造成的危害。血管內皮生長抑制因子(vascular endothelial growth inhibitor，VEGI)是腫瘤壞死因子超家族成員，因其在多種疾病中具有重要作用而受到了廣泛關注。VEGI除了具有抑制血管新生的作用外，還能調節(jié)炎癥反應和抑制水腫的生成。本研究利用液壓沖擊法制作小鼠腦外傷模型，觀察

2、分析腹腔注射VEGI對小鼠顱腦損傷早期神經功能，血腦屏障，腦水腫的影響以及對腦組織局部炎癥反應的調節(jié)作用，探索VEGI在腦外傷急性期是否具有神經保護作用。
　　研究方法:選用清潔級健康成年雄性C57BL/6小鼠共計180只，按照隨機化原則分為假手術組(Sham組)、腦創(chuàng)傷后腹腔注射VEGI組(TBI+VEGI組)和腦創(chuàng)傷后腹腔注射VEGI溶媒組（TBI+Vehicle組）。分組后建立小鼠液壓打擊顱腦創(chuàng)傷模型，VEGI于傷后1小時、

3、24小時、48小時經腹腔注射。應用改良神經功能評分法(mNSS)評價其行為學功能。TBI小鼠于傷后第1天和3天處死，應用干濕重法檢測各組小鼠傷后腦組織含水量;應用伊文思藍測定了各組小鼠傷后第3天的血腦屏障滲透率;應用免疫組織化學/免疫熒光組織化學染色觀察腦創(chuàng)傷后第1天、3天激活的小膠質細胞和星形膠質細胞在創(chuàng)傷灶周圍的變化情況。應用免疫組織化學染色方法觀察各組實驗小鼠的中性粒細胞在腦創(chuàng)傷后第1天、3天在腦創(chuàng)傷灶的浸潤情況，應用酶聯(lián)免疫吸附

4、測定法(ELISA)測定各組小鼠腦組織中細胞因子IL-1β和TNF-α變化。應用Tunel染色技術檢測了各組小鼠海馬神經細胞凋亡的變化情況。通過Morris水迷宮于各組小鼠傷后第7-12天進行認知功能評價。
　　研究結果:液壓打擊后，小鼠遭受創(chuàng)傷后mNSS即刻升高，TBI+VEGI組與TBI+Vehicle組傷后12小時組間評分無明顯差異(P=0.136)，傷后第1天，TBI+VEGI治療組小鼠評分低于TBI+Vehicle組，并

5、持續(xù)至傷后第7天，各時間點差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。各創(chuàng)傷組小鼠腦組織HE染色均有TBI后典型病理變化。免疫熒光染色顯示，傷后第1天，各組TBI小鼠創(chuàng)傷側ED1+小膠質細胞大量激活，并于第3天時下降。TBI+VEGI組各時間點ED1+小膠質細胞數(shù)量低于TBI+Vehicle組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。免疫組化顯示:傷后第1天，各組TBI小鼠創(chuàng)傷側GFAP+星形膠質細胞大量激活，第3天時數(shù)量下降，TBI+VEGI組各時

6、間點GFAP+星形膠質細胞數(shù)量低于TBI+Vehicle組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。應用ELISA檢測技術觀察創(chuàng)傷側的促炎細胞因子IL-1β和TNF-α濃度發(fā)現(xiàn):在傷后第1天和3天，各組TBI小鼠創(chuàng)傷側IL-1β和TNF-α水平均高于Sham組，TBI+VEGI組各時間點IL-1β和TNF-α的水平低于TBI+Vehicle組(P＜0.05)。干濕重觀察發(fā)現(xiàn):在傷后第1天和3天，與Sham組相比，TBI+VEGI組和TBI+V

7、ehicle組腦水含量均明顯增加; TBI+VEGI組在1天和3天腦組織的水含量明顯低于TBI+Vehicle組，各時間點差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。伊文思藍滲透率實驗發(fā)現(xiàn):傷后第3天，TBI+VEGI組小鼠血腦屏障滲透率低于TBI+Vehicle組(P＜0.05)。免疫組化染色顯示，在傷后第1天，各組TBI小鼠創(chuàng)傷灶周圍有大量中性粒細胞聚集，并于第3天達到高峰。TBI+VEGI組小鼠腦組織中MPO+中性粒細胞數(shù)目在傷后第1天、

8、第3天明顯低于TBI+Vehicle組(P＜0.05)。Tunel染色觀察小鼠腦創(chuàng)傷后神經細胞的凋亡情況發(fā)現(xiàn):傷后第3天，TBI+VEGI組腦創(chuàng)傷周圍神經元的凋亡數(shù)目明顯低于TBI+Vehicle組(P＜0.05)。Morris水迷宮實驗示，隨著觀察時間延長，不同處理組小鼠認知功能逐漸恢復。與TBI+Vehicle組比較，VEGI治療組小鼠訓練第1天認知功能無明顯改善(P=0.612)。但從第2天開始，處理組小鼠逃避潛伏期縮短，并維持至