1、潛伏感染是慢病毒逃脫宿主免疫監(jiān)視和免疫清除的重要機制。宿主通過先天免疫以及獲得性免疫抵抗外界病毒的感染。干擾素調節(jié)是先天免疫的重要組成部分,干擾素可以誘導一系列干擾素刺激基因的大量表達。干擾素刺激基因所編碼干擾素刺激蛋白的高水平表達可以抑制病毒的復制,這種抑制是導致慢病毒建立潛伏感染的原因之一。諸多外界因素可以影響慢病毒的感染狀態(tài),使慢病毒由潛伏感染轉向裂解感染。其中其他病毒與慢病毒的超感染便是影響因素之一,其他病毒的超感染往往可以促進

2、慢病毒的復制。本研究以牛免疫缺陷病毒(BIV)為慢病毒模型,對一種干擾素刺激蛋白ISG15在BIV潛伏感染中的作用進行了初步的探討。ISG15是一種可以被Ⅰ型干擾素誘導表達的小分子蛋白,屬于類泛素修飾蛋白家族。與泛素類似,ISG15可以共價地連接到一些蛋白上,進行蛋白的翻譯后修飾,該修飾稱之為蛋白質的ISGylation修飾。ISG15以及ISGylation修飾參與多種重要的生物學過程,其中包括:先天免疫、腫瘤發(fā)生以及懷孕建立等。各種

3、屬間ISG15的氨基酸序列同源性并不高。目前,對于牛ISG15(bovineISG5,bISG15)的研究主要集中于其在母牛懷孕的建立方面,而bISG15在先天免疫以及抗病毒方面的研究基本上是空白。我們首先建立了bISG15的相關檢測體系,包括bISG15的體外啟動子Luciferase報告系統(tǒng)、bISG15 mRNA的RT-PCR檢測系統(tǒng)以及bISG15表達的Western-blot檢測系統(tǒng)等。在此基礎上,對bISG15在胎牛肺細胞(

4、FBLs一種BIV的飼養(yǎng)細胞)中的表達、BIV與bISG15的相互影響(包括BIV感染對bISG15表達水平的影響、blSG15對BIV復制的抑制、BIV調控蛋白bTat對bISG15抑制的抵抗等)進行了初步的研究。最后,我們研究了RNA病毒牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)和DNA病毒牛皰疹病毒Ⅰ型(BHV-1)對bISG15表達的影響,并對其分子機制進行了初步探討。本文獲得了以下重要結果及結論:1.通過RT-PCR以及Western-bl

5、ot檢測系統(tǒng)證實,FBLs中bISG15本底表達水平不高,但通過poly I:C或LPS刺激可以引起bISG15表達水平的上調:2.通過免疫熒光以及染色體免疫沉淀實驗證實,FBLs中bISG15表達水平的上調與干擾素調節(jié)因子3(IRF-3)密切相關,并通過體外轉染實驗證明IRF-3過表達可以激活bISG15的啟動子;3.BIV感染FBLs,可以引起bISG15的少量上調,而隨感染進行bISG15的增加表達水平逐漸下降;4.bISG15參