1、目的： 依據(jù)阿爾茨海默病(AD)發(fā)病機理中的“A β級聯(lián)假說”，從A β產生的氧化損傷毒性的環(huán)節(jié)的各個靶點入手，并與神經營養(yǎng)肽APP17進行對比，探討參知健腦方組分對A β的神經元毒性的保護作用。 方法： 1．選擇參知健腦方組成中藥的有效組分(即人參皂昔Rgl、知母皂苷元Sar、芍藥苷Pae)，首先利用細胞毒性試驗確定各組分有效且無毒的作用濃度，再利用正交設計的方法，將各個濃度按不同配比組合，通過對正常SH-Y5

2、Y細胞和擬AD細胞模型SH-Y5Y細胞增殖率的觀察，比較各組配比組合后對細胞增殖率的影響，篩選出最佳配比組合用于下一步實驗。 2．用25μmol/L的Aβ25-35孵育SH-Y5Y細胞復制AD細胞模型，分別在6h、24h、48h、72h觀察β淀粉樣蛋白對于細胞的活性和存活率、乳酸脫氫酶的釋放量、細胞內活性氧的產生量、細胞周期的變化、細胞凋亡率的變化及6h和24h細胞內產生的凋亡相關信號轉導蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-

3、3的變化來觀察A β產生的神經毒性的作用，在各個時間點分別給予中藥有效組分配伍和APF17肽10μmol·L<'-1>，通過與模型組對比觀察對A β產生的細胞毒性的抑制作用。 結果： 1．人參皂苷、知母皂苷元、芍藥苷三種組分對細胞有增殖作用且無毒的作用濃度分別是人參皂苷(1.5625，3.1256，6.25μg·mL<'-1>)知母皂苷元(6.25，12.5，25 μg·mL<'-1>)，芍藥苷(6.25，12.5，25

4、μ g·mL<'-1>). 2. 利用正交實驗設計所得的最佳配比是(人參皂苷1.5625μg·mL<'-1>，知母皂苷元6.25μg·mL<'-1>，芍藥苷6.25μg·mL<'-1>)。 3．Aβ作用細胞后，細胞的存活率在隨著作用時間的延長表現(xiàn)出了下降的趨勢，與此相應，細胞的LDH釋放量表現(xiàn)為隨著作用時間的延長逐漸增加的趨勢。參知健腦方組分組對細胞的存活率有一定的提高作用，對LDH釋放量起到了一定的抑制作用，與APP1

5、7肽組比較無顯著性差異。 4．細胞的凋亡率在6h開始升高，至24h達峰值，此后凋亡率又逐漸降低，但與正常對照組始終差異顯著。細胞周期表現(xiàn)為細胞被阻抑于G0-G1期的比例增加，S期的比例下降。參知健腦方組分組對細胞的凋亡率有一定的抑制作用，能促進細胞周期S期的比例增加，與APP17肽組比較無顯著性差異。 5．細胞內的活性氧隨作用時間的延長逐漸增加，參知健腦方組分組表現(xiàn)出了一定的抑制作用，與APP17肽組比較無顯著性差異。