1、目的:觀察CTLA4Ig聯(lián)合shRNA阻斷樹突細(xì)胞B7/CD28共刺激通路在小鼠心臟移植中的抗排斥作用,并探討其抗排斥機(jī)制。
　　 方法:采用培養(yǎng)基細(xì)胞因子選擇法體外培養(yǎng)小鼠骨髓來源DC,應(yīng)用己構(gòu)建的針對(duì)B7-1(CD80)及B7-2(CD86)的shRNA質(zhì)粒載體pB7shRNA轉(zhuǎn)染DC,流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后DC表面抗原CD80、CD86、MHCⅡ、CD11c表達(dá)水平；建立小鼠異位心臟移植模型,設(shè)置A組(異系對(duì)照組)、B組(

2、未轉(zhuǎn)染DC組)、C組(轉(zhuǎn)染DC組)、D組(CTLA4-Ig治療組)、E組(未轉(zhuǎn)染DC+CTLA4-Ig治療組)、F組(轉(zhuǎn)染DC+CTLA4-Ig治療組)。觀察各組移植心臟存活時(shí)間,評(píng)定術(shù)后7天移植物排斥反應(yīng)病理分級(jí),以熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)移植物中IL-2mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:經(jīng)過體外培養(yǎng),每只小鼠可獲得1.5-2×107個(gè)骨髓來源DC,細(xì)胞具備典型樹突狀結(jié)構(gòu),pB7shRNA質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染DC后經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)其表面抗

3、原CD80、CD86表達(dá)變化由93.57％、70.07％分別下降至30.83％、40.06％,而MHCⅡ、CD11c表達(dá)無明顯變化。與異系對(duì)照組和未轉(zhuǎn)染DC組相比,轉(zhuǎn)染DC+CTLA4-Ig治療組移植心臟存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)(中位生存期25天vs8天和8天);排斥反應(yīng)病理分級(jí)明顯降低;IL-2mRNA表達(dá)明顯降低；IL-2mRNA表達(dá)與排斥反應(yīng)病理分級(jí)呈明顯正相關(guān)。
　　 結(jié)論:pB7shRNA可顯著抑制小鼠骨髓DC B7表達(dá)。術(shù)前