1、錳是人體必需的一種微量元素，但攝入過量則會對機體產生不良作用。近年來，隨著無鉛汽油和農藥代森錳等的廣泛使用，造成環(huán)境中錳的含量逐漸升高，增加了普通人群的接觸機會。在職業(yè)環(huán)境中，某些接觸錳的作業(yè)還可能導致急性中毒，因此錳對人體的影響正日益受到重視。神經系統是錳的主要毒作用器官，錳神經毒性的主要病變部位在蒼白球、丘腦下核、尾狀核、殼核以及黑質，在臨床上表現為全身性的運動徐緩及普遍的肌肉強直，采用左旋多巴等治療效果也不明顯。因此在闡明錳神經毒

2、性機制的基礎上提出有效的醫(yī)學防護措施具有重要的現實意義。
　　近年來，一些研究證明，錳導致腦代謝異常和DA能神經元的損害，是導致震顫性麻痹癥狀的主要原因。盡管目前國內外已進行了一系列關于錳神經毒性機制的研究，但是其確切機制仍然不明確。
　　通過建立實驗性錳中毒小鼠的動物模型，觀察錳中毒后動物運動行為的變化，旨在探討錳中毒所致運動功能障礙的相關機制，以期為錳中毒的防治提供理論依據。具體研究內容包括：1.錳中毒對小鼠運動行為的影

3、響；2.錳中毒對黑質中GABA能神經元和DA能神經元的形態(tài)學及其活性的影響；3.錳中毒對黑質中KCC2和NKCC1蛋白表達的影響；4.錳中毒對黑質中DA能神經元和微管的形態(tài)學影響；錳中毒對黑質中tau以及磷酸化tau的影響。
　　方法：
　　1.根據小鼠腦立體定位圖譜選定注射點坐標，采用腦立體定位法將濃度為1mol/L的MnCl2.4H2O注射進入動物左側尾殼核。
　　2.用滾軸實驗、曠場實驗和爬桿實驗觀察錳中毒對小鼠

4、運動行為的影響。
　　3.免疫熒光雙標法觀察錳中毒后黑質中GFP和TH分別和Fos的共表達；免疫印跡法檢測黑質中Fos、GFP、TH、KCC2和NKCC1蛋白表達水平的影響。
　　4.免疫組化觀察錳中毒對黑質中DA能神經元的影響和免疫熒光雙標法觀察黑質中微管蛋白β-tubulin3和TH的共表達；Western blot檢測黑質中β-tubulin3、tau蛋白磷酸化表達水平的影響。
　　結果：
　　1.錳中毒對

5、小鼠運動行為的影響：Rotarod實驗結果顯示錳作用后24h，動物從滾軸上停留時間與對照組和假手術組相比明顯減少（P<0.05），具有統計學意義；曠場實驗結果表明錳作用后，小鼠總水平運動距離(總運動距離)分別與正常組和假手術相比明顯縮短（P<0.01），水平運動能力（動物運動次數）分別與正常組和假手術組無顯著變化（P>0.05）；爬桿實驗結果顯示錳作用后24h，小鼠運動速度明顯減慢，動物從開始運動到完全轉為頭向下的時間和頭向下的時間到下

6、到桿底的時間分別與正常組和假手術相比明顯延長（P<0.001），且具有統計學意義。
　　2.免疫熒光雙標法觀察錳中毒后黑質中DA能和GABA能神經元形態(tài)學及其活性的變化：染錳組黑質中Fos陽性神經元與對照組相比明顯增多，而DA能神經元數量無明顯變化，且Fos和DA能神經元并未發(fā)現共存；染錳后黑質中Fos陽性神經元與對照組相比明顯增多，而GABA能神經元數量無明顯變化，但Fos和GABA能神經元大量共存；免疫印跡法檢測結果顯示染錳組

7、黑質中Fos蛋白表達水平與對照組相比明顯明顯升高，但GFP和TH蛋白表達水平無明顯改變。
　　3.KCC2抑制劑對小鼠運動行為的影響：錳染毒后黑質中KCC2蛋白表達明顯升高，NKCC1未見明顯變化，使用KCC2抑制劑后KCC2蛋白表達與手術組相比有所降低，可部分逆轉錳中毒誘導的小鼠在滾軸上的停留時間；用KCC2抑制劑后也可部分回轉錳中毒后小鼠總水平運動距離的減少。
　　4.錳中毒對黑質中DA能神經元和微管形態(tài)的影響：免疫組織

8、化學結果顯示錳中毒后黑質中DA能神經元數量與對照組相比明顯減少，且β-tubulin3陽性神經元和DA能神經元共存有一定程度的減少；Westernblot結果顯示錳中毒后β-tubulin3和tau1蛋白表達水平明顯降低，tauSer199、tauSer202明顯減少、p-tauSer396和p-tauSer404磷酸化程度明顯增加。
　　結論：
　　1.錳中毒可引起小鼠運動行為的明顯變化，如運動減少、遲緩、肌肉僵直等癥狀。

9、
　　2.錳中毒使GABA能和DA能神經元的數量未發(fā)生變化，且黑質致密部的DA能神經元并未被激活，而黑質網狀部大量GABA能神經元被激活，提示GABA能神經元可能是錳中毒引起神經損害的主要靶細胞之一。此外，還有一部分的Fos既不表達在DA能神經元也不表達在GABA能神經元，提示錳中毒引起的毒性效應可能是多種遞質綜合效應的結果。
　　3.使用KCC2抑制劑對錳中毒引起的運動行為障礙有一定的改善作用,可能是由于黑質部特有KCC2