1、牛結(jié)核病(bovine tuberculosis)已被國際獸醫(yī)局(OIE)列為B類動(dòng)物疫病，是由牛型分枝桿菌(Mycobacterium boyis)和結(jié)核分枝桿菌(MYcobacterium tuberculosis)等結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌株所引起的一種慢性消耗性傳染病。牛患結(jié)核病后，主要表現(xiàn)為乳房炎和結(jié)核性胸膜炎等癥狀，造成牛奶及相關(guān)食品的數(shù)量和品質(zhì)下降。同時(shí)牛結(jié)核病還能夠傳染給人，引起人畜共患病。 本研究構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌(

2、H<,37>Rv)、牛型分枝桿菌減毒株M. bovis BCG的雙相凝膠電泳圖譜。以高通量的方法展示牛結(jié)核分枝桿菌的蛋白組，該工作為證實(shí)抗原和發(fā)現(xiàn)新抗原提供了依據(jù)，也為探討牛結(jié)核發(fā)病機(jī)制提供了一項(xiàng)技術(shù)平臺。 目前分枝桿菌屬的其它種(如鳥分枝桿菌(Mycobacterium avium)以及其亞種副結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium paratuberculosis)也能引起牛群感染和致病。因此有必要摸索一種快速、準(zhǔn)確鑒定分

3、枝桿菌的方法。本研究采用16S rDNA序列分析和表型鑒定分析我國第四次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查的44株非結(jié)核分枝桿菌，11株分枝桿菌生化鑒定無法分類，而16S rDNA序列分析確定了它們在分枝桿菌屬中的地位?？梢?6S rDNA和ITs序列分析方法分析分枝桿菌屬和種較適合。采用16S rDNA and ITS序列和全細(xì)胞脂肪酸氣相色譜分析廣州地區(qū)70份非結(jié)核分枝桿菌，全細(xì)胞脂肪酸氣相色譜分析將70份標(biāo)本中67株分枝桿菌確定了分類地位，可

4、見全細(xì)胞脂肪酸氣相色譜方法分析分枝桿菌菌株快速、準(zhǔn)確。全細(xì)胞脂肪酸氣相色譜分析與16S rDNA and ITS序列分析的結(jié)果相比，僅存在3株(3/70)不一致的鑒定。16S rDNA和ITS序列分析和全細(xì)胞脂肪酸氣相色譜分析方法相結(jié)合的多相分類對分枝桿菌屬中的種的鑒定更為準(zhǔn)確、自然。 本研究以我國第四次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查(簡稱流調(diào))為依托，構(gòu)建Spoligotyping和VNTR兩種基因分型方法，分析流調(diào)獲得的441份分枝

5、桿菌。分析證實(shí)：在我國存在一個(gè)遺傳關(guān)系較近的結(jié)核分枝桿菌基因型…北京基因型，且呈較高頻率流行64.9％(265/408)。同時(shí)采用上述兩種基因分型方法分析8株牛分枝桿菌(含2株標(biāo)準(zhǔn)和6株中國獸醫(yī)菌種目錄的牛型分枝桿菌，均經(jīng)表型鑒定)，6株來自世界各地的BCG女兒株和3株分離自新疆PPD(+)病牛的分枝桿菌。結(jié)果提示2株標(biāo)準(zhǔn)牛型分枝桿菌和6株BCG菌株為特征性牛分枝桿菌Spoligotyping指紋圖譜。6株中國獸醫(yī)菌種目錄和3株新疆分離