1、牛結核分枝桿菌(Mycobacterium bovis)是引起牛結核病的病原體，侵染宿主廣泛，可感染多種家畜和野生動物，對人類和動物健康構成巨大危害。溶血磷脂酶是催化溶血磷脂失活的主要途徑，被認為在調節(jié)生物活性脂質水平中起關鍵作用。但牛結核分枝桿菌溶血磷脂酶(LLP)的功能及作用尚不清楚。本實驗利用基因重組技術，克隆了LIP基因，成功構建其表達載體pET30a(+)-LIP，誘導其高效表達、純化蛋白并制備多克隆抗體，為進一步研究牛結核分

2、枝桿菌溶血磷脂酶(LIP)的功能及在牛結核分枝桿菌中的作用奠定了基礎。實驗結果如下：
　　 1.以牛結核分枝桿菌的DNA為模板，通過PCR的方法擴增克隆LIP基因，并進行了核苷酸序列測定。結果表明，核苷酸序列與GenBank上所公布的序列同源性為100％。
　　 2.將所擴增基因克隆于原核表達載體pET30a(+)，將重組表達載體轉入宿主菌BL21(DE3)進行誘導表達，表達蛋白經SDS-PAGE和Western blo

3、t分析，結果證明LIP蛋白獲得高效表達，表達量占菌體總量的31％，分子量大小為30kD左右；利用割膠回收法對表達蛋白進行純化，純化率大于95％。
　　 3.重組LIP蛋白能夠與患牛結核病的牛陽性血清發(fā)生特異性反應，有望成為牛結核分枝桿菌新的診斷抗原，為進一步研究牛結核分枝桿菌溶血磷脂酶的功能及在牛結核分枝桿菌中的作用奠定了基礎。
　　 4.成功地制備了針對LIP蛋白的特異性多克降抗體，通過間接ELISA檢測，該多克隆抗體