1、分類號：學(xué)校代碼：10464UDC：研究生學(xué)號：201207294Z密級：碩士專業(yè)學(xué)位論文碩士專業(yè)學(xué)位論文禽霍亂ptfa基因PCR檢測方法的研究學(xué)位申請人：人：魏景利指導(dǎo)教師：師：宮強副教授合作教師：師：陳彥斌工程師專業(yè)學(xué)位類專業(yè)學(xué)位類別：別：農(nóng)業(yè)推廣碩士專業(yè)學(xué)位領(lǐng)域?qū)I(yè)學(xué)位領(lǐng)域：食品加工與安全2014年4月萬方數(shù)據(jù)摘要I論文題目：文題目：禽霍亂禽霍亂ptfa基因基因PCR檢測方法的研究檢測方法的研究專業(yè)：業(yè)：食品加工與安全食品加工與安

2、全研究生：生：魏景利魏景利指導(dǎo)教師：指導(dǎo)教師：宮強摘要禽霍亂，又被稱為禽出血性敗血癥或者禽多殺性巴氏桿菌病，是由多殺性巴氏桿菌引起的一種禽類傳染病。多殺性巴氏桿菌對藥物和陽光、干燥抵抗力不強，因此該病多發(fā)生于悶熱、潮濕的環(huán)境條件下，各種家禽，如雞、火雞、鵝、鴨等都可感染，且本病的發(fā)病率和死亡率都很高。家禽感染禽霍亂后，主要是采用抗生素治療，可能會導(dǎo)致禽肉制品中抗生素殘留量過高。目前，人們對禽霍亂的診斷，多數(shù)仍舊依據(jù)臨床癥狀和分離病原菌來

3、判斷，雖然這種傳統(tǒng)的方法能取得可靠的結(jié)果，但這些方法的工作量大，操作繁瑣，需要花費較長的時間，對禽霍亂爆發(fā)流行時的診斷和疾病控制都不利，因此急需研究一種快速、特異、敏感的診斷檢測方法。本實驗以禽多殺性巴氏桿菌CVCC474菌株作為研究對象，提取該菌的基因組，根據(jù)GenBank中已發(fā)表的禽多殺性巴氏桿菌的ptfa的基因序列，設(shè)計和合成了一對特異性引物，建立了一種基于禽多殺性巴氏桿菌ptfa基因的PCR檢測方法，并對PCR反應(yīng)的退火溫度、循

4、環(huán)次數(shù)、引物濃度、Mg2濃度、dNTPs濃度五個反應(yīng)參數(shù)進行優(yōu)化，檢測了該方法的特異性和敏感性。結(jié)果成功擴增出了禽多殺性巴氏桿菌435bp的ptfa特異性基因片段，而對雞致病性大腸桿菌、雞金黃色葡萄球菌和雞白痢沙門氏菌三種病原菌均未擴增出相應(yīng)片段。敏感性試驗結(jié)果表明本方法可檢測到最低1pgμL的禽多殺性巴氏桿菌基因組DNA。本試驗為禽多殺性巴氏桿菌病快速檢測方法的研究奠定了一定的基礎(chǔ)，為我國禽肉制品的安全性作出一定的貢獻。關(guān)鍵詞：詞：禽