1、弧菌是對人類危害較大的一類細菌,它普遍存在于動物性食品當中。已經(jīng)被人類證明的對人類有致病性的弧菌有霍亂孤菌(V.eholerae)、創(chuàng)傷弧菌(V.vulnifcus)、副溶血性弧菌(V.parahaemolyticus),溶藻弧菌(V.alginofjgticus)、擬態(tài)弧菌(V.mimicus)、梅氏弧菌(V.metschnikovii)等。其中創(chuàng)傷弧菌、副溶血弧菌、擬態(tài)弧菌、只是偶爾對人類有致病性,而梅氏弧菌很少感染人類,僅有少數(shù)分

2、離株從人類的尿液、血液中被分離。這些弧菌都不允許在進出口食品中檢出。目前,國內(nèi)關(guān)于致病性弧菌的檢測方法主要是生化鑒定法,此方法雖然經(jīng)典,但操作復雜,檢測耗費很長時間,不宜做大批量樣本的檢測；而且一些樣品中由于分離株生化反應不典型,在實際工作中,其檢測鑒別存在一定困難,不適宜作為快速檢測弧菌的方法。因此不能適應國際進出口貿(mào)易的現(xiàn)實需要。因此,本研究目的在于能針對食品中的致病性弧菌建立一種既能快速、準確、高效的檢測方法,同時還可以對霍亂弧菌

3、進行快速分型的檢測方法,來減少工作量同時又能減少檢測成本,來滿足進出口食品檢驗的需要。
　　 以霍亂弧菌、溶藻弧菌、副溶血性弧菌、擬態(tài)弧菌、創(chuàng)傷弧菌和梅氏弧菌為研究對象,采用試劑盒法提取6種致病性弧菌的標準菌株的基因組DNA,用分光光度計檢測提取效果。根據(jù)6種弧菌的特異基因序列,設計并合成特異性引物,進行6種弧菌的特異性、敏感度和實際樣品的PCR-DHPLC檢測。同時依據(jù)霍亂弧菌毒素相關(guān)基因:膠原酶基因(vcc基因),此基因是霍

4、亂弧菌共有基因；毒力基因(ctxA基因和tcpA基因),這兩個基因是O1群和O139群共有基因；O139群特有的毒力基因(LPSgt基因),分別設計合成了四對特異性引物,并對其PCR退火溫度和反應體系進行優(yōu)化來確定最佳的反應條件,進行霍亂弧菌多重PCR-DHPLC快速分型檢測。
　　 用6種弧菌的特異性引物和霍亂弧菌相關(guān)毒素的特異性引物,經(jīng)各反應體系和引物退火溫度的優(yōu)化后,建立了6種弧菌的PCR-DHPLC快速檢測方法和霍亂弧菌

5、Ol群、O139群,非O1群/非O139群的多重PCR-DHPLC快速分型方法。該6種PCR-DHPLC方法的檢測敏感度均低于60cfu/mL。
　　 本研究所建立的致病性弧菌的PCR-DHPLC檢測及霍亂弧菌快速分型的方法,與傳統(tǒng)微生物檢測方法和PCR-凝膠電泳法相比,具有快速、準確、高效的優(yōu)點,在致病性弧菌的檢測與霍亂弧菌快速血清分型上具有廣泛的應用前景。通過本試驗的研究,建立了快速檢測食品中致病性弧菌的新方法,并建立了霍亂