1、弧菌（Vibrio）廣泛分布在海洋、江河和湖泊的水體中，從兩極的極冷環(huán)境到赤道的熱帶環(huán)境的水域中都有分布，隨著人們生活水平的提高，對海產品的需求量越來越大，弧菌已然成為了威脅水產養(yǎng)殖和人們的身體健康的重要病原菌，但是弧菌的種類繁多，使在檢測和防治方面受到了巨大的挑戰(zhàn)，所以建立弧菌的多重檢測和基層檢測是非常必要的。副溶血弧菌是弧菌中威脅水產養(yǎng)殖的重要病原弧菌，每年都會造成巨大的經濟損失，副溶血弧菌有兩條染色體，每條染色體上各有一個不同的外

2、膜蛋白ompA的編碼基因，分別為VP0764和VPA1186兩段基因，取這兩段基因分別設計兩對引物，F(xiàn)/R引物上分別具有BamH和Sacl酶切位點，用BL21載體進行蛋白表達，純化鑒定之后用來制備多抗，然后進行免疫磁珠的制備進行菌體捕捉。以副溶血弧菌的毒力因子基因(vptdh)和特異性基因(vptox)、霍亂弧菌的腸毒素基(vcctx)和外膜蛋白基因(vcomp)和溶血素基因(vchly)、擬態(tài)弧菌的溶血素基因(vmha)和特異性基因(

3、vmtox)、創(chuàng)傷弧菌的溶血素基因(vvha)和創(chuàng)傷弧菌多重毒素基因(vvrtx)、溶藻弧菌的膠原蛋白酶基因(vacol)為目的基因設計引物和特異性微球探針，進行液相芯片技術實驗研究。設計的引物與五種弧菌以及大腸桿菌、沙門氏菌進行PCR擴增，產物與特異性探針雜交讀數(shù)，證明得到液相芯片技術具有很好的特異性;特異性探針與不同菌濃度的PCR產物進行雜交，證明得到其具有很高的靈敏度;十種特異性探針分別與單一PCR產物和混合PCR產物進行雜交，證

4、實液相芯片技術多重檢測的可操作性。搜索創(chuàng)傷弧菌溶血素A基因(hemolysin gene A，HA)和多重毒素(repeats in toxin，RTX)毒力基因的并設計兩種基因的內、外引物，進行LAMP檢測目的基因和人工模擬樣品，通過肉眼觀察白色沉淀，初步判斷檢測結果，再通過瓊脂糖凝膠電泳進一步確認檢測結果。LAMP檢測兩種目的基因靈敏度達到10CFU/ml，人工模擬樣品檢測的靈敏度分別為1×102CFU/g(VV-RTX)和1×10