1、該論文以轉基因大豆及其加工產品作為實驗材料,相應的包含了兩個相關而又不同水平的兩個部分.一部分是轉基因大豆(Roundup-Ready soybean)及其加工產品的DNA水平的檢測技術研究,另一部分是轉基因大豆的蛋白水平檢測技術研究.在DNA水平上的研究,首先優(yōu)化了轉基因大豆及其加工產品豆粕、豆腐、豆奶和醬油的DNA抽提方法,得到了OD值在1.7-1.9之間的高質量的可用于PCR檢測的DNA .隨后,建立了基于聚合酶鏈式反應(poly

2、merase chain reaction,PCR)和能夠在同一反應管中同時擴增兩個片斷的復合PCR反應基礎上的檢測方法,對轉基因大豆的外源基因EPSPS(5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase,來源于A.tumefaciens菌株CP4)和內源基因Lectin(用于轉基因大豆的鑒別)進行檢測.根據EPSPS和Lectin特異的基因序列,利用Primer Premier 5.0設計了兩對引

3、物.使用這兩對引物進行的PCR分析結果表明對轉基因大豆的檢測靈敏度可達0.01ng.復合PCR檢測結果表明,該文設計的這兩對引物可以成功的用于轉基因大豆及其加工產品豆粕、豆腐、豆奶和醬油的檢測.最后,利用Primer Premier 5.0和Beacon Designer 2.0軟件設計了相應的引物和探針,建立了實時熒光定量PCR的Taqman技術反應體系,并繪出了用于大豆轉基因成分定量檢測的標準曲線.Taqman技術的PCR分析結果表

4、明定量PCR檢測的靈敏度可達0.01ng.應用雜交瘤技術，建立了17株能穩(wěn)定分泌抗EPSPS重組蛋白的單克隆抗體（McAb）的雜交瘤細胞株.所有的雜交瘤細胞株接種至預先進行腹腔注射降植烷的Bal b/c小鼠腹腔均能穩(wěn)定的產生瘤性腹水，腹水用45％的硫酸銨溶液進行初步純化.隨后將得到的單克隆抗體初步用于轉基因大豆的雙抗體夾心ELISA（DAS-ELISA）檢測當中.利用抗體技術進行的免疫分析是用于已知抗原檢測的理想方法，單克隆抗體（通常具