1、碩士學(xué)位論文論文題目STAT5b介導(dǎo)生長(zhǎng)激素調(diào)控雞IGFI基因表達(dá)的研究研究生姓名王慧娟指導(dǎo)教師姓名顧志良專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)遺傳學(xué)研究方向動(dòng)物分子遺傳學(xué)論文提交日期2013年4月STAT5b介導(dǎo)生長(zhǎng)激素調(diào)控雞IGFI基因表達(dá)的研究中文摘要I中文摘要生長(zhǎng)軸是動(dòng)物體內(nèi)從下丘腦垂體靶器官的一系列激素及其受體所組成的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)。生長(zhǎng)激素(GH)通過(guò)IGFI介導(dǎo)調(diào)節(jié)動(dòng)物生長(zhǎng)和細(xì)胞分化，通過(guò)提高生長(zhǎng)軸中GH和IGFI水平，促進(jìn)增重、提高飼料轉(zhuǎn)化率和改善肉

2、品質(zhì)，是畜禽生長(zhǎng)調(diào)控的一種新途徑。GH可以通過(guò)STAT5b的介導(dǎo)促進(jìn)哺乳動(dòng)物IGFI基因的表達(dá)，本研究首先通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)GH可以促進(jìn)雞原代肝細(xì)胞IGFI基因表達(dá)的上調(diào)，然后通過(guò)生物信息學(xué)、分子克隆技術(shù)、體外細(xì)胞共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)、雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)和ChIP技術(shù)等研究了雞IGFI基因及其上下游側(cè)翼序列上起增強(qiáng)子作用的STAT5b結(jié)合位點(diǎn)，試圖弄清GH調(diào)控雞的IGFI基因表達(dá)的分子機(jī)理。主要研究結(jié)果如下：(1)為了研究雞肝臟中

3、表達(dá)的IGFI基因在離體條件下受GH調(diào)控的mRNA表達(dá)情況，以3～4周齡雌性商品代AA肉雞為實(shí)驗(yàn)材料，采用改良的半原位兩步灌流法并結(jié)合消化法分離肝細(xì)胞，進(jìn)行原代培養(yǎng)；采用熒光定量PCR的方法，檢測(cè)GH處理12h后IGFImRNA表達(dá)情況。結(jié)果表明：膠原酶消化法所獲得的肝細(xì)胞分離良好，形態(tài)完整，鋪板4h即貼壁，繼續(xù)培養(yǎng)24h即可用于GH處理實(shí)驗(yàn)；GH能夠引起雞肝細(xì)胞中IGFImRNA表達(dá)的上調(diào)。(2)為了弄清楚GH促進(jìn)雞IGFImRNA表

4、達(dá)上調(diào)是否通過(guò)STAT5b介導(dǎo)，首先利用生物信息學(xué)和VISTA程序?qū)﹄uIGFI基因(NW_001471513)及其上下游側(cè)翼端的STAT5b結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在雞IGFI基因約50kb和其5側(cè)翼序列約40kb以及其3側(cè)翼序列約10kb共約100kb序列上共含有57個(gè)STAT5b結(jié)合位點(diǎn)，按其順序被命名為S1～n；TTCNNNGAA是人、小鼠、大鼠等物種保守的STAT5b結(jié)合位點(diǎn)的共有序列；與小鼠等其他哺乳動(dòng)物相比，并沒(méi)有保守的