1、抗原表位,又稱抗原決定簇,是抗原分子抗原性的基礎(chǔ).正確而詳細(xì)地繪制抗原表位圖譜對(duì)疾病的診斷、設(shè)計(jì)無(wú)毒副作用的多表位疫苗以及免疫治療試劑等具有積極的意義.因此目前在預(yù)防醫(yī)學(xué)領(lǐng)域許多關(guān)于以表位為基礎(chǔ)的如表位疫苗和特異性診斷試劑等的研究也就成了熱點(diǎn).而噬菌體展示技術(shù)作為近年來(lái)新興起的研究蛋白質(zhì)抗原表位的有利工具,已經(jīng)成功地鑒定出了多種病原微生物的抗原表位.這就為揭示一些病原體未知的抗原表位,從而進(jìn)一步達(dá)到預(yù)防和控制疾病的發(fā)生提供了條件.豬繁殖

2、與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRSV引起的,以妊娠母豬的繁殖障礙以及各年齡豬呼吸道癥狀為特征的一種傳染病.該病于1987年首次在美國(guó)發(fā)現(xiàn),目前,已廣泛流行于世界各國(guó),給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失.1996年中國(guó)分離到第一株P(guān)RRS病毒,命名為CH-1a株.雖然對(duì)該病毒的一些分子生物學(xué)特已經(jīng)進(jìn)行了深入研究,但迄今為止,對(duì)于CH-1a株的抗原表位還

3、沒(méi)有報(bào)道.為深入了解CH-1a株的抗原結(jié)構(gòu),便于設(shè)計(jì)科學(xué)合理的疫苗和診斷試劑,我們對(duì)PRRSV CH-1a株進(jìn)行了抗原表位的鑒定.該研究利用噬菌體隨機(jī)7肽庫(kù)對(duì)PRRSV CH-1a N蛋白的單克隆抗體N3H2進(jìn)行了3輪篩選,得到了3個(gè)模擬表位:"STTPFKK"、"TKHPQFV"和"STGNRLT".為進(jìn)一步研究表位結(jié)構(gòu),該研究構(gòu)建了PRRSV ORF7基因特異性肽庫(kù),利用N3H2進(jìn)行了3輪篩選,獲得3個(gè)陽(yáng)性噬菌體克隆.序列分析表明,

4、這3個(gè)克隆都展示有"IQTAFNQGA"9個(gè)氨基酸的序列,對(duì)應(yīng)于PRRSVCH-1a株N蛋白的79-87位氨基酸殘基(aa 79-87).人工合成這段表位編碼序列并進(jìn)行原核表達(dá),利用單抗N3H2對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行Western blot分析和ELISA鑒定,均為陽(yáng)性.由此表明IQTAFNQGA為PRRSV CH-1a株的一個(gè)線性B細(xì)胞抗原表位,并將其命名為Ep703.通過(guò)序列比較發(fā)現(xiàn),Ep703與Meulenberg等(1998)在LV株N

5、蛋白中鑒定的一個(gè)構(gòu)象表位(由aa51-67與aa 80-90構(gòu)成)的aa 80-88序列完全相同,而CH-1a株aa50-66與LV株aa 51-67相比較,發(fā)現(xiàn)二者存在2個(gè)氨基酸的差異(LV A<'60>→CH-1a T<'59>和LV L<'65>→CH-1a R<'64>).LV株N蛋白含有2個(gè)半胱氨酸(C<'27>、C<'76>),而CH-1a株中含有3個(gè)半胱氨酸(C<'27>、C<'76>和C<'90>),因此二者的N蛋白在通

6、過(guò)二硫鍵形成高級(jí)結(jié)構(gòu)的方式可能不同,導(dǎo)致兩種蛋白具有不同的空間結(jié)構(gòu)和抗原性.二級(jí)結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn),aa 79-87區(qū)域以β折疊為主,這種構(gòu)型有助于表位的形成.蛋白的三維結(jié)構(gòu)顯示,Ep703的9個(gè)氨基酸多肽暴露于蛋白的表面.3個(gè)模擬表位與表位Ep703的序列"IQTAFNQGA"相比,相同的氨基酸很少,但是各表位氨基酸的極性卻有一個(gè)共同的特征:親水性氨基酸比例較大,疏水性氨基酸比例較少.通過(guò)與GenBank中41株美洲型分離株的N蛋白的序列進(jìn)