水稻轉(zhuǎn)錄因子RdreB1的基因克隆和功能分析.pdf_第1頁(yè)
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1、該試驗(yàn)以順式調(diào)控元件rd293cis構(gòu)建誘餌質(zhì)粒,通過(guò)酵母單雜交方法從水稻cDNA文庫(kù)中篩選獲得9個(gè)陽(yáng)性質(zhì)粒,結(jié)果顯示陽(yáng)性質(zhì)粒中插入的cDNA的序列一致,僅長(zhǎng)度不同.根據(jù)核苷酸順序推導(dǎo)出cDNA編碼一個(gè)219氨基酸組成的多肽,網(wǎng)上同源序列比對(duì)表明,該多肽有一段保守的EREBP/AP2結(jié)構(gòu)域,N端為核定位信號(hào)(NLS),而C端則可能是一個(gè)轉(zhuǎn)錄的激活區(qū)域,屬于EREBP/AP2類轉(zhuǎn)錄因子.對(duì)經(jīng)過(guò)各種逆境、激素處理的水稻以及不同組織的水稻進(jìn)行

2、RT-PCR分析,研究RdreB1基因在不同逆境、激素處理下的表達(dá)以及在不同組織中的表達(dá)情況,結(jié)果表明,在干旱和低溫脅迫誘導(dǎo)下水稻RdreB1基因存在過(guò)量表達(dá).通過(guò)農(nóng)桿菌蘸花法將按植物偏愛(ài)密碼子重新合成的、與RdreB1基因的氨基酸序列相同的RdreB1I基因轉(zhuǎn)入擬南芥Columbia,通過(guò)GUS活性檢測(cè)和PCR、RT-PCR結(jié)果驗(yàn)證獲得轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株,干旱和低溫生理實(shí)驗(yàn)表明,與對(duì)照植株相比,大部分陽(yáng)性植株都能夠耐受干旱脅迫和低溫凍害.

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