1、水稻是我國目前種植面積最廣的農(nóng)作物之一，而葉片又是水稻最重要的營養(yǎng)器官，水稻籽粒中有2/3以上的干物質(zhì)是開花后通過光合作用獲得的，因此葉片的功能及衰老對水稻產(chǎn)量有重要影響。近年來轉(zhuǎn)錄因子已被研究證明在植物分子育種中具有巨大的潛在價值和廣闊的應(yīng)用前景。NAC轉(zhuǎn)錄因子是近十幾年來已被證明在植物生長發(fā)育過程如胚發(fā)育、側(cè)根形成、花發(fā)育等，植物信號轉(zhuǎn)導(dǎo)如生長素信號通路等，植物抵御生物脅迫以及非生物脅迫中都有著重要的作用。NAC轉(zhuǎn)錄因子家族基因At

2、NAP已經(jīng)被證明在擬南芥中可以延緩葉片衰老，但該基因在水稻中還未見其與作物生物量相關(guān)的報道。通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)和遺傳分析手段的有力結(jié)合，將會分離鑒定出更多的對植物改良有重大意義的轉(zhuǎn)錄因子，為進一步選育和改良植物的新品種奠定了堅實的工作基礎(chǔ)。
　　 本研究通過生物信息學(xué)分析從水稻日本晴(Oryza sativa L.)的基因組中克隆到一個與擬南芥衰老相關(guān)的基因AtNAP(Atlg69490)的同源基因OsNAP(Os03g032780

3、0)，為進一步研究OsNAP的功能，運用嵌合式顯性抑制技術(shù)，抑制下游靶基因的表達。使用顯性抑制元件SRDX構(gòu)建了pCAMBIA1304-35S：OsNAP-SRDX表達載體。通過農(nóng)桿菌浸染方法將pCAMBIA1304-35S：OsNAP-SRDX表達載體轉(zhuǎn)化至水稻中花11品種。通過潮霉素、Real-timePCR及Western-Blot等方法鑒定獲得了具有表型的轉(zhuǎn)基因株系4株，并且對轉(zhuǎn)基因株系的農(nóng)藝性狀進行了統(tǒng)計分析。主要研究結(jié)果如下

4、：⑴NAC轉(zhuǎn)錄因子OsNAP的克隆。根據(jù)軟件獲得的序列設(shè)計兩對特異引物，從水稻日本晴的基因組DNA克隆了OsNAP基因。測序結(jié)果表明OsNAP的ORF為1179bp，推測其編碼蛋白含有392個氨基酸，等電點為8.55，分子量為42.195KDa。⑵植物表達載體的構(gòu)建。將OsNAP與顯性抑制元件SRDX融合構(gòu)建了由組成型啟動子2X35S驅(qū)動的植物表達載體pCAMBIA1304-OsNAP-SRDX和pCAMBIA1304-OsNAP，將它

5、們導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHA105，經(jīng)測序驗證結(jié)果正確，可用于后續(xù)的水稻遺傳轉(zhuǎn)化。⑶水稻的遺傳轉(zhuǎn)化。以水稻中花11品種為受體材料，通過農(nóng)桿菌浸染方法將含有pCAMBIA1304-35S：OsNAP-SRDX植物表達載體轉(zhuǎn)基因水稻中花11品種，目前已經(jīng)獲得有表型的轉(zhuǎn)基因植株。⑷轉(zhuǎn)基因株系的評價。通過轉(zhuǎn)基因過程獲得的T0代轉(zhuǎn)基因株系，經(jīng)過潮霉素鑒定選擇陽性植株種入大田進行培養(yǎng)。待T0代成熟后，對其種子發(fā)苗通過Realtime PCR和Western