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文檔簡介
1、SR/CAMTA蛋白家族是真核生物界普遍存在的一類轉(zhuǎn)錄因子,在生物體生長發(fā)育調(diào)控過程中行使重要的功能。SR/CAMTAs蛋白有多個預(yù)測的功能域,且以一個相似的順序排列。此外,他們還擁有一個新穎的序列特異性DNA結(jié)合域(CG-1),這個DNA結(jié)合域不僅能夠直接與DNA結(jié)合激活轉(zhuǎn)錄,還可以與其他的轉(zhuǎn)錄因子相互作用而作為一個輔助激活子來激活轉(zhuǎn)錄。SR/CAMTAs基因在生物體內(nèi)的功能呈現(xiàn)多樣化,不僅能夠調(diào)節(jié)生物體對外部刺激的響應(yīng)、控制生長和細(xì)
2、胞增殖,還可能在情景記憶、抑癌因子方面發(fā)揮重要功能。目前在番茄中已經(jīng)分離出7個SR/CAMTAs基因成員,但他們的功能并不非常明確。本研究選取了與其他6個同源性較低的SlSR4基因作為研究對象,進(jìn)行了進(jìn)一步的研究工作。
采用Real-timePCR技術(shù)分析了SlSR4基因在番茄各組織的表達(dá)水平,SlSR4基因在AC++各組織中呈現(xiàn)廣譜性的表達(dá),其中Fl(花)中表達(dá)最高,果實(shí)時(shí)期表達(dá)水平相對較低;在突變體Nr、rin的果實(shí)中,S
3、lSR4基因也有不同程度的表達(dá)。
采用Real-timePCR技術(shù)分析了SlSR4基因在番茄幼苗脫水、傷害、冷、鹽脅迫處理下的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,SlSR4基因在脫水、傷害、冷和鹽四種處理?xiàng)l件下均有不同程度的響應(yīng),但在鹽處理下響應(yīng)最明顯。這表明:SlSR4基因很可能在這些非生物脅迫的信號途徑中行使重要的功能。
采用Real-timePCR技術(shù)分析了SlSR4基因在番茄幼苗在GA、ABA、ACC、Meja、IAA和SA
4、六種激素處理下的表達(dá)水平。結(jié)果表明:SlSR4基因?qū)BA的誘導(dǎo)并不敏感,對ACC和MeJA有輕微的響應(yīng),對GA、IAA和SA有較明顯的響應(yīng)。
我們構(gòu)建了SlSR4基因的RNAi沉默載體,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)獲得了葉片中沉默效率較好的轉(zhuǎn)基因番茄株系。采用Real-timePCR技術(shù)分析了番茄果實(shí)B+4時(shí)期幾個果壁代謝相關(guān)基因的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn),SlSR4基因沉默導(dǎo)致PG、PE1、CEL基因的表達(dá)上調(diào),且降低了番茄果實(shí)的耐
5、貯性。此外,SlSR4基因在果實(shí)中的沉默效率遠(yuǎn)低于葉片。
我們利用T1代轉(zhuǎn)基因幼苗進(jìn)行了鹽脅迫實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明:SlSR4基因沉默影響了轉(zhuǎn)基因幼苗下胚軸的生長,降低了對鹽脅迫的耐受性,還抑制了脅迫相關(guān)基因的表達(dá)。
我們在轉(zhuǎn)基因番茄中檢測了其他6個SR/CAMTA家族基因的表達(dá)水平,結(jié)果顯示:在轉(zhuǎn)基因番茄B+4果實(shí)中SlSR2、SlSR2L、SlSR3和SlSR3L的表達(dá)有輕微上調(diào),SlSR1和SlSR1L沒有明顯變化;
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