水稻OsTLP基因的克隆及其功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、葉綠體是植物細胞內一個特殊且重要的細胞器,是進行光合作用的主要場所,還是脂肪酸和色素合成、無機氮轉化為氨基酸的重要場所,是目前質體中研究的最詳細、功能最重要的一種細胞器。植物葉綠體內部由基質和類囊體組成,基質是光合作用暗反應的場所,類囊體是植物進行光合作用的關鍵部位,光反應及大部分與光合作用有關的蛋白質和蛋白復合物均定位于類囊體膜及類囊體腔中。因此了解類囊體膜蛋白結構與功能對于全面了解植物光合作用的分子機理有重大意義。
  我們利

2、用生物信息學方法,在水稻中分析預測到一個定位于葉綠體類囊體基因—OsTLP基因;并使用RT-PCR技術克隆到OsTLP基因的全長cDNA,序列分析其含有一個完整的開放閱讀框,編碼的蛋白質含有257個氨基酸,其氨基酸序列與玉米、擬南芥等其他高等植物的氨基酸序列同源性高達50%以上。利用在線軟件TargetP1.1等預測得知該蛋白質定位于葉綠體中。通過半定量PCR方法分析了OSTLP基因在轉錄水平上的表達情況。結果顯示,OsTLP基因在葉中

3、表達量最高,而在根中幾乎不表達,且其表達具有節(jié)律性。
  利用表達載體pCAMBIA1301,構建植物表達載體pCAMBIA1301-OsTLP及干擾載體pCAMBIA1301-OsTLPRi,轉入到農桿菌EHA105中,分別轉化煙草和水稻。經篩選得到轉基因苗,再經PCR鑒定及GUS染色檢測初步證實獲得轉基因植株。和對轉OsTLP基因的幼苗進行透射電鏡(TEM)觀察,結果表明:與對照組(轉化空載體pCAMBIA1301)相比,超表

4、達OsTLP基因的植株葉綠體超微結構較對照組葉綠體的形態(tài)有顯著的變化,超表達植株葉綠體類囊體膜上的片層數目明顯增加且更為緊密。
  根據水稻OsTLP基因上游序列擴增啟動子,通過Plantcare對OsTLP基因啟動子順式調控元件進行分析表明:序列中除包含基本的啟動元件及大量的CAAT盒(與增強轉錄效率有關)外,還包含大量光調節(jié)相關元件,如3-AF1bindingsite、GATA-box和I-box,此外還含有ABRE序列(與脫

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