1、草坪植物在人類生活中的地位越來越重要，篩選與培育優(yōu)良的草坪植物新品種是草坪業(yè)的重要任務(wù)之一。長期以來，國內(nèi)外學(xué)者利用引種馴化、雜交育種等育種手段，圍繞改良草種耐寒、耐熱與抗病等性狀，已經(jīng)選育出了大量優(yōu)良品種，但這種傳統(tǒng)育種方法存在著育種周期長、優(yōu)良組合的預(yù)見性差、遺傳連鎖累贅難以打破等缺點(diǎn)。以分子遺傳學(xué)為理論基礎(chǔ)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，為植物的遺傳改良提供了一條新的分子育種途徑。將遺傳轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)基因技術(shù)與傳統(tǒng)育種手段相結(jié)合，不僅可以拓展草種改良的范

2、圍，而且也有助于解決一些常規(guī)育種方法難以解決的特殊問題，為草坪植物改良和新品種選育打開一個(gè)嶄新的局面。 同大多數(shù)農(nóng)作物如水稻、玉米、小麥等一樣，雜草在草坪建植和種子生產(chǎn)過程中有著極大的危害，往往要耗費(fèi)大量的人力財(cái)力，但效果卻并不明顯。通過基因工程培育抗除草劑草坪植物，可以節(jié)省大量費(fèi)用，便于機(jī)械化以及擴(kuò)大高效與超高效除草劑品種的應(yīng)用范圍，解決除草劑殘留的問題，是目前最為經(jīng)濟(jì)有效的一種手段。本文對高羊茅(Festucaarundin

3、aceaSchreb.)和馬蹄金(DichondrarepensForst.)兩類具有代表性的草坪植物進(jìn)行了組織培養(yǎng)與植株再生的研究，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對馬蹄金進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化試驗(yàn)，并獲得了以下研究結(jié)果：1高羊茅成熟胚離體培養(yǎng)及高頻植株再生以“佛浪(Finelawn)”、“王朝(Dynasty)”、“野馬Ⅱ號(hào)(MustangⅡ)”、“賓狗(Bingo)”、“交戰(zhàn)Ⅱ號(hào)(CrossfireⅡ)”和“凌志(Barlexas)”6個(gè)高羊茅品種的成熟

4、種子為外植體，采用均勻設(shè)計(jì)研究了不同生長調(diào)節(jié)劑、基因型和培養(yǎng)基對愈傷組織誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明：2,4-D對高羊茅成熟種子萌芽及愈傷組織誘導(dǎo)的影響極大；基因型對愈傷組織誘導(dǎo)有一定影響；培養(yǎng)基對愈傷組織誘導(dǎo)無任何影響；愈傷組織在不添加任何生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上即可進(jìn)行分化。高羊茅最佳愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基組合為N6+18mg/2,4-D，外植體為“王朝”的成熟種子，其愈傷組織誘導(dǎo)率為95.60％，且分化率達(dá)100％。 2馬蹄金離體培養(yǎng)及高

5、頻植株再生以馬蹄金下胚軸、子葉、葉片和葉柄為外植體，采用正交設(shè)計(jì)法研究了生長調(diào)節(jié)劑2,4-D、6-BA、KT和α-NAA對其愈傷組織誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明，不同外植體在含有不同生長調(diào)節(jié)劑的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行離體培養(yǎng)時(shí)，均可誘導(dǎo)出愈傷組織且出愈率為43.3％～100％。生長調(diào)節(jié)劑是愈傷組織誘導(dǎo)的關(guān)鍵，2,4-D對愈傷組織誘導(dǎo)具有顯著的影響，適于馬蹄金愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為：MS+1.0mg/L2,4-D+0.2mg/L6-BA+0.2mg/L

6、KT+1.0mg/Lα-NAA。對馬蹄金葉片來源的愈傷組織進(jìn)行了分化研究，得到其最適分化培養(yǎng)基為：MS+5.0mg/L6-BA+3.0mg/LZT+100mg/L水解酪蛋白，其分化頻率最高達(dá)到74.80％。 3農(nóng)桿菌介導(dǎo)的馬蹄金遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立利用農(nóng)桿菌EHA105/pCAMBIA3300與馬蹄金葉片來源的愈傷組織共培養(yǎng)轉(zhuǎn)化，采用正交設(shè)計(jì)法從培養(yǎng)基的浸染時(shí)間、農(nóng)桿菌的OD600值和pH值三個(gè)方面進(jìn)行研究，建立了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化Bar

7、基因的馬蹄金的優(yōu)化遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，獲得了轉(zhuǎn)Bar基因的馬蹄金抗性植株，其最佳浸染參數(shù)為：t=10min、OD600=0.6～0.8、pH5.4。篩選培養(yǎng)基為：MS+1.0mg/L2,4-D+0.2mg/L6-BA+0.2mg/LKT+1.0mg/Lα-NAA+250mg/LCef+10mg/LPPT，抗性愈傷組織頻率可達(dá)到85.35％。分化培養(yǎng)基為：MS+5.0mg/L6-BA+3.0mg/LZT+100mg/L水解酪蛋白+250mg/L