1、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文大熊貓（Ailuropodamelanoleuca）皮膚成纖維細(xì)胞系選育的初步研究姓名：張明申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：鄭鴻培朱慶200306011引言細(xì)胞或組織培養(yǎng)(體外培養(yǎng))技術(shù)是t7廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)以及迅速發(fā)展的生物工程的重要技術(shù)(Frsehney，RI，1983)。細(xì)胞培養(yǎng)是建立細(xì)胞系的基礎(chǔ)。細(xì)胞體外培養(yǎng)歷史悠久，最早進(jìn)行組織培養(yǎng)的是德國Roux(1895)，隨后H

2、arrison(1907)、Careel(1910)創(chuàng)建了蓋玻片懸滴培養(yǎng)法，建立了細(xì)胞體外培養(yǎng)的基本模式。1948年Sanford等創(chuàng)立了分散的單細(xì)胞培養(yǎng)方法，建立了第一個單細(xì)胞克隆的細(xì)胞株；1950年～lorgan等人提出了第一個人工合成的M199培養(yǎng)液配方；1957年Dulbecco等用胰蛋白酶消化處理組織，獲得鋪層細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)展史上，這些具有開創(chuàng)性的工作促進(jìn)了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展。20世紀(jì)50年代之后，體外培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)入了蓬勃

3、發(fā)展的時期，各種細(xì)胞系不斷建立。目前，全世界已有多個體外培養(yǎng)物冷凍保藏機(jī)構(gòu)，如：世界最大的美國典型培養(yǎng)物收藏中心(ATCC)保藏了近20000株細(xì)胞，中國典型培養(yǎng)物保藏中心(cCTcc)保藏了4000多株細(xì)胞，這些細(xì)胞在全世界范圍內(nèi)交流，用于科學(xué)研究和資源保存(鄂征，1995)。細(xì)胞在基因資源的保存上，主要有兩種方式：對于瀕危物種。保存體細(xì)胞、配子或胚胎是基因資源保存簡潔有效的方式(劉愛華，1995)；另一種是基因資源以eDNA文庫的方

4、式進(jìn)行保存。大熊貓是世界上瀕危的大型哺乳動物，建立大熊貓細(xì)胞系，對其進(jìn)行基因資源保存和相關(guān)研究都具有重要意義。11細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞系選育研究的意義細(xì)胞生命活動的主要方面可以在體外再現(xiàn)，細(xì)胞基因組資源可以體外擴(kuò)大倍增，因此，細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)幾乎可以應(yīng)用到生物、醫(yī)學(xué)研究和基因資源保存等領(lǐng)域(Ca文俊，1997t王立新，2000)在細(xì)胞生物學(xué)研究中，細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞生理(Gabel，G，1996)和細(xì)胞遺傳與基因表達(dá)(Lin，CQ，1986)的研

5、究，以及細(xì)胞分化、發(fā)育過程中細(xì)胞間的相互作用、細(xì)胞內(nèi)的控制機(jī)制、神經(jīng)系統(tǒng)的作用等研究都離不開細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)(Auerbach，R，7975；Cox，RP，1958：Finbow，雎F，1981：Bornsteln，M8，1958：Minna，J，1973)通過對正常細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的差異比較，研究腫瘤細(xì)胞的的生物學(xué)特性，Cowdry(1955)通過對培養(yǎng)細(xì)胞分裂時相研究，發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞分裂時間縮短；Easty(1976)通過細(xì)胞培養(yǎng)和植塊培養(yǎng)