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![端粒介導(dǎo)的甘藍(lán)型油菜人工小染色體的篩選和鑒定.pdf_第1頁(yè)](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/9/88e0fa41-0c21-4056-8610-56769f323f38/88e0fa41-0c21-4056-8610-56769f323f381.gif)
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文檔簡(jiǎn)介
1、本文以甘藍(lán)型油菜(Brassica napus,AACC,2n=38)品種Westar為材料,在中國(guó)科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所胡贊民研究組油菜人工小染色體研究的基礎(chǔ)上,利用熒光原位雜交和PCR技術(shù)等方法進(jìn)行人工小染色體的鑒定和篩選,使用自交和雜交的方式獲得了具有一對(duì)人工小染色體的純合油菜新材料,并對(duì)外源基因是否能夠定點(diǎn)整合到油菜小染色體上進(jìn)行了相關(guān)研究,旨在為油菜進(jìn)一步分子育種及染色體結(jié)構(gòu)與功能的研究提供新的技術(shù)途徑和新材料。主要研究
2、結(jié)果如下:
1.通過(guò)對(duì)具有截?cái)嗟娜旧w的兩個(gè)轉(zhuǎn)基因株系pWY86-5-73和pWY86-5-75的自交、雜交繼代培養(yǎng),擴(kuò)大了轉(zhuǎn)基因植株庫(kù)的量,獲得了具有小染色體且能夠穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)基因株系,并在培養(yǎng)過(guò)程中進(jìn)行了轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株的篩選;
2.根據(jù)pWY86-5質(zhì)粒結(jié)構(gòu)的特點(diǎn),本文中采用噴灑除草劑和PCR鑒定的方法對(duì)每代培育的所有pWY86-5轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了篩選,每代均選取陽(yáng)性植株繼續(xù)培育,通過(guò)對(duì)每代植株的逐步篩選得到了實(shí)
3、驗(yàn)預(yù)期中的含有一定數(shù)量小染色體的轉(zhuǎn)基因株系;
3.使用pWY96作為探針雜交各代PCR陽(yáng)性pWY86-5轉(zhuǎn)基因植株花蕾的染色體,以觀測(cè)其中的小染色體,通過(guò)熒光原位雜交鑒定,獲得了能夠穩(wěn)定遺傳的、僅具有一對(duì)小染色體的純合轉(zhuǎn)基因植株;
4.利用從白菜型油菜(Brassica rapa)的BAC文庫(kù)中選出的BAC克隆L17制作探針,將該探針與端粒重復(fù)序列探針45S及著絲粒重復(fù)序列探針5S同時(shí)與發(fā)生了染色體截?cái)嗍录膒WY8
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