1、禽馬立克氏?。∕arek，s disease，MD）是由雞馬立克氏病病毒引起的（Marek，s disease virus，MDV）一種高度接觸性傳染病，可引起禽的惡性淋巴腫瘤性疾病。近年來，在一些即使已經(jīng)免疫了CVI988/Rispens等商品疫苗的雞群，仍然會(huì)發(fā)生MDV的感染并引起腫瘤的發(fā)生，給當(dāng)前家禽產(chǎn)業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。我們有興趣知道這類發(fā)生免疫失敗的雞群中雞馬立克氏病病毒是否發(fā)生了致病性和主要致病基因的變化，為此，本研究對(duì)

2、從不同CVI988/Rispens商品疫苗的雞群中分離鑒定了三株MDV野毒株，并對(duì)其主要致病基因進(jìn)行了克隆測(cè)序和序列分析，并對(duì)純化后的毒株開展了致病性實(shí)驗(yàn)。
　　1.不同雞群中MDV野毒株的分離鑒定和主要致病基因序列分析
　　為了研究近年來我國MDV的流行和分布情況、毒力變化及其分子衍化的規(guī)律，本研究通過臨床剖檢，病毒分離， IFA檢測(cè)和致病基因的擴(kuò)增從曾免疫過商品化疫苗CVI988/Rispens的3個(gè)白羽肉種雞場(chǎng)發(fā)病雞的

3、淋巴細(xì)胞中分離到三株適應(yīng)雞胚成纖維細(xì)胞的MDV野毒株（分別命名為SDAU1501、SDAU1502、SDAU1503）。對(duì)3株MDV的主要致病基因vIL8、pp38、meq基因進(jìn)行了PCR擴(kuò)增并與標(biāo)準(zhǔn)參考毒株進(jìn)行氨基酸序列比較分析發(fā)現(xiàn): SDAU1503株與CVI988和814株親緣關(guān)系較近，而SDAU1501和SDAU1502株與中國早期分離的GX0101親緣關(guān)系較近。同源性分析發(fā)現(xiàn)SDAU1503株的meq基因與CVI988/Ris

4、pens同源性最高為99.1％，而SDAU1502與SDAU1501同源性100%，且與GX0101相同；pp38基因相對(duì)保守，SDAU1503和SDAU1502與GX0101序列完全一致，而SDAU1501與GX0101的同源性為99.7%，與其他國外參考毒株的同源性也高達(dá)99.3%；vIL8基因SDAU1503與4個(gè)國外標(biāo)準(zhǔn)毒株同源性最高為99.3%，而SDAU1501和SDAU1502與GX0101同源性最高，分別為98.5和99

5、.3%，與國外參考毒株的同源性為97%。根據(jù)對(duì)MDV三個(gè)致病基因的序列比較發(fā)現(xiàn)，SDAU1501和SDAU1502的致病基因與強(qiáng)毒株氨基酸同源性很高，而SDAU1503的致病基因與弱毒疫苗株氨基酸同源性很高，但對(duì)于其各自的致病性還需要進(jìn)一步的致病性試驗(yàn)研究。
　　2.近期分離MDV野毒株的致病性分析
　　為了進(jìn)一步觀察對(duì)分離到的3株MDV野毒株的致病性，將3株MDV野毒人工感染1日齡海藍(lán)褐蛋雞進(jìn)行了致病性試驗(yàn)研究。結(jié)果顯示，

6、SDAU1501和SDAU1502毒株毒力較強(qiáng)，感染SDAU1501和SDAU1502的雞出現(xiàn)臨床癥狀最早被發(fā)現(xiàn)于攻毒后21天，雞只死亡最早出現(xiàn)于攻毒后的25天，發(fā)病雞羽毛松亂，臨床癥狀主要集中于7-10周，感染SDAU1501毒株的海藍(lán)褐雞群可以達(dá)到100%和90%的發(fā)病率和死亡率，以及54%的腫瘤發(fā)生率，感染SDAU1502毒株的海藍(lán)褐雞群可以達(dá)到100%和77%的發(fā)病率和死亡率，以及44%的腫瘤發(fā)生率；SDAU1503毒株毒力較弱

7、，感染SDAU1503病毒的雞出現(xiàn)臨床癥狀主要集中于10-12周，臨床癥狀最早出現(xiàn)于攻毒后47天，死亡時(shí)間最早出現(xiàn)于攻毒后52天，發(fā)病率可達(dá)到70%，但死亡率和腫瘤發(fā)生率卻只有34%和14%左右。對(duì)感染了3株病毒的自然死亡雞只和攻毒16周后剖殺的雞只逐只進(jìn)行剖檢發(fā)現(xiàn)，3株MDV病毒均能引起不同程度的心臟、肝臟和腎臟腫瘤，并且個(gè)別雞只出現(xiàn)了皮膚、腺胃和卵巢的腫瘤。感染了SDAU1501和SDAU1502的雞群，在感染病毒后第6-8周的死亡

8、雞剖檢主要可見到豆粒大小的心臟腫瘤；肝臟、脾臟腫大，零星出現(xiàn)腫瘤，感染后10-12周的死亡雞只開始出現(xiàn)彌散性的肝臟腫瘤，感染病毒后的14-16周，部分的發(fā)病的死亡雞只剖檢可以看見腺胃腫瘤性病變。但感染SDAU1503的雞只，腫瘤發(fā)生的時(shí)間稍有延遲，但出現(xiàn)肝臟病變的時(shí)間要早于心臟的病變，攻毒后的第8周的死亡雞只剖檢可見腎臟和肝臟的腫瘤，在14-16周零星可見心臟腫瘤。
　　本研究結(jié)果表明，近年來MDV新的變異不斷發(fā)生，且毒力逐步變強(qiáng)