1、MYOZ1基因在肌小節(jié)組裝和不同類型肌纖維形成等過程中起到廣泛的調控作用，MYOZ1的功能涉及骨骼肌快肌和慢肌的形成及比例。因其編碼的蛋白在肌纖維Z線形成及快肌纖維相關生理過程中起關鍵作用而被廣泛關注。該基因在骨骼肌生長發(fā)育、肌纖維類型調控以及動物的體型和肉質研究方面均具有重要研究價值，尋找影響MYOZ1基因表達的調控因子對改善家畜的肉質和體型方面有重要意義。本實驗室利用芯片結果結合表達譜分析，初步確定miR-432和MYOZ1的靶向關

2、系，通過研究靶向MYOZ1的miR-432及其在肌纖維類型變化中的調節(jié)作用，為探究miRNA調控骨骼肌生長發(fā)育及肌肉類型的分子機理奠定基礎。取得的主要結果如下:
　　 (1)運用定量Q-PCR進行MYOZ1基因的組織表達情況檢測，在大白豬的心、肝、脾、肺、腎、小腸、骨骼肌和脂肪等組織中，該基因在骨骼肌中表達量最高而在其他組織中表達量較少。此外在豬胚胎期33天，65天和成年的骨骼肌中檢測MYOZ1的表達量發(fā)現(xiàn)該基因的表達隨著豬從胚

3、胎期到成年呈上調表達。
　　 (2)定量檢測miR-432和MYOZ在C2C12細胞分化0天、1天、2天、4天和6天五個時期的表達量，發(fā)現(xiàn)miR-432隨著細胞的分化呈顯著的下調，而MYOZ1基因表達隨著細胞的分化呈顯著上調。
　　 (3)通過細胞中檢測雙熒光素活性，初步證明miR-432和MYOZ1的靶向互做關系。通過Western Blot免疫印跡實驗和免疫熒光實驗檢測MYOZ1蛋白表達水平可被miR-432下調，進

4、一步說明MYOZ1是miR-432的靶基因。
　　 (4)利用xCELLigence實時監(jiān)測系統(tǒng)分析miR-432在C2C12細胞增殖中的作用時發(fā)現(xiàn)，講內源表達的miR-432抑制后的C2C12細胞的增殖作用明顯小于對照組細胞，說明抑制了miR-432后細胞的增殖速度下降，miR-432影響肌細胞增殖。
　　 (5) C2C12細胞中過表達miR-432后分別分化培養(yǎng)1、3、5天，收集細胞總RNA通過Q-PCR技術檢測快

5、肌maker MYH4和慢肌maker MYH7的表達情況，結果表明過表達miR-432后慢肌maker表達量上升較快，說明miR-432可以促進慢肌的形成。通過在C2C12中過表達MYOZ1和抑制miR-432提高MYOZ1表達水平后再分別分化1、2、4天，檢測快慢肌maker的表達情況，結果表明過表達MYOZ1和抑制細胞中本底的miR-432后，快肌makerMYH4的表達量上升較快，說明過量表達的MYOZ1和低量的miR-432導