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![馬鈴薯晚疫病抗性相關(guān)基因StBL-SLG-PK的克隆和功能分析.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/9/d7158990-e7c5-438a-9f4e-6e5993162a47/d7158990-e7c5-438a-9f4e-6e5993162a471.gif)
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文檔簡介
1、馬鈴薯(Solanum tuberosum L.)作為世界上第四大糧食作物,增產(chǎn)空間大,將在國家糧食安全方面發(fā)揮重要作用。馬鈴薯在生產(chǎn)過程中受很多病害的影響,其中由致病疫霉菌(Phytophthora infestans(Mont.)de Bary.)引起的晚疫病影響最大,發(fā)病嚴(yán)重時甚至造成絕收。馬鈴薯對晚疫病的抗性無論是通過PTI還是ETI過程,都伴隨著活性氧的爆發(fā)。前人通過VIGS在本氏煙草中沉默StBL-SLG/PK的同源基因,煙
2、草對晚疫病菌88069的抗性發(fā)生改變,但對基因具體功能沒有作深入研究。本研究旨在通過抗性相關(guān)基因StBL-SLG/PK的克隆和功能分析,探索抗性機(jī)制,主要結(jié)果如下:
1.通過已有的mRNA的信息,對比PGSC中馬鈴薯測序信息,擴(kuò)增StBL-SLG/PK的全長。基因全長2373 bp,可能編碼一個由790個氨基酸組成的絲/蘇氨酸激酶。從E3的RNA和PCC1群體母本DNA擴(kuò)增的結(jié)果顯示,該基因并不具有內(nèi)含子。
3、2.分析了StBL-SLG/PK基因在E3不同器官的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)該基因在成熟在組織中的表達(dá)量明顯高于幼嫩組織。利用信號分子處理馬鈴薯植株葉片,JA誘導(dǎo)StBL-SLG/PK從12h一直到48 h持續(xù)快速表達(dá),ETH誘導(dǎo)該基因從24 h到48 h持續(xù)升高表達(dá),而受其它信號分子誘導(dǎo)并不強(qiáng)烈,說明StBL-SLG/PK可能處于JA和ETH信號途徑。干旱和鹽脅迫處理中,StBL-SLG/PK的表達(dá)量一直持續(xù)升高。
3.洋蔥表皮亞細(xì)
4、胞定位發(fā)現(xiàn)StBL-SLG/PK表達(dá)蛋白定位在細(xì)胞核的核膜上。構(gòu)建StBL-SLG/PK表達(dá)蛋白膜內(nèi)部分和膜外部分的原核表達(dá)載體,并且純化到目的蛋白。通過γ32-ATP放射性自顯影發(fā)現(xiàn)StBL-SLG/PK表達(dá)的蛋白具有自激酶活性。
4.構(gòu)建StBL-SLG/PK干涉和超量表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化鄂馬鈴薯3(E3)號分別得到干涉和超量株系5個和20個。所有株系接種晚疫病病原菌發(fā)現(xiàn):與對照E3相比超量株系抗病增強(qiáng)而干涉株系則更敏感。這
5、個現(xiàn)象說明StBL-SLG/PK基因是馬鈴薯抗病反應(yīng)中的正調(diào)控因子。
5.通過VIGS(virus induced gene silencing)沉默StBL-SLG/PK在本氏煙草中的同源基因,發(fā)現(xiàn)沉默株系對晚疫病的抗性明顯下降,并且對不同的生理小種的抗性不一致,其中對晚疫病菌LJX18的侵染比88069更敏感。瞬時表達(dá)實驗表明StBL-SLG/PK并不參與STO和R3a介導(dǎo)HR反應(yīng)(Hypothesitive Resp
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